大果水晶梨及其褐色果皮突变体pal基因克隆及表达分析-园艺学;果树学专业论文 word格式.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 缩略词 英文缩写 英文全称 中文名称 CTAB PAL Cetyltrimethylammonlum Bromid Phenylalanine Ammonia-lyase 十六烷基三甲基溴化铵 苯丙氨酸解氨酶 DIECA Sodium diethyldithiocarbamate trihydrate  二乙胺基二硫代甲酸钠 EB Etllidillmbromide 溴化乙锭 EDTA Ethylene Diamine Tetraacetie Acid 乙二胺四乙酸 PVP Polyvinyl pyrrolidone 聚乙烯吡咯烷酮 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 2-Amino-2-hydroxymethy-1,3-propane Tris  diol 三羟甲基氨基甲烷 VC VitaminC 维生素 C(抗坏血酸) 摘要 大果水晶梨褐色果皮突变体与大果水晶梨原品种相比，在果皮表面有一层 木栓层。木栓层中的木质素是苯丙烷类代谢途径产生的酚类化合物的聚合物。 苯丙氨酸解氨酶（PAL）是苯丙烷代谢过程中的第一个关键酶。因此，研究 pal 基因对于探索大果水晶梨褐色果皮突变体的形成具有重要意义。 以大果水晶梨及其褐色果皮突变体的叶片为材料提取 DNA，分别以原品种 和突变体的 DNA 为模板克隆 pal。分别在幼果期（果点、果皮均未变褐）、果点 变褐期、果皮变褐期和采收期采取果实样品，测定果皮 PAL 的活性、蛋白质含 量、比活力及其 pal 的基因表达。结果如下： 在果实幼果期、果点变褐期和果皮变褐期突变体果皮中的 PAL 活性和蛋白 含量略高于原品种。在果点变褐期和果皮变褐期，大果水晶梨突变体果皮的 PAL 比活力均高于原品种。 分别以大果水晶梨及其褐色果皮突变体叶片的 DNA 为模板，使用引物Ⅰ克 隆得到大果水晶梨及其突变体的 pal1 的基因片段，序列分析表明两者没有差异。 以 3 对简并引物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别克隆得到大果水晶梨及其褐色果皮突变体的 pal2 基因的片段。利用 DNAMAN 软件对序列进行拼接，得到 2414 bp 的大果水晶梨 pal2 序列，其中外显子 1997 bp，内含子 417 bp；翻译得到的氨基酸序列由 665 个氨基酸组成。得到 2411 bp 的大果水晶梨突变体的 pal2 序列，其中外显子 2001 bp，内含子 410 bp；翻译得到的氨基酸序列包含 666 个氨基酸。大果水晶梨 pal2 的内含子长于突变体的 7 bp。 大果水晶梨及其褐色果皮突变体在不同时期的 pal 表达结果显示，大果水晶 梨 pal1 的表达量在各个时期均高于突变体，表明 pal1 与果皮变褐呈负相关的趋 势。而大果水晶梨 pal2 的表达量在果点变褐期、果皮变褐期、采收期均低于突 变体，表明 pal2 与果皮变褐呈正相关的趋势。 根据序列分析和定量表达的结果，推测大果水晶梨突变体 pal2 的内含子由 于碱基的突变或内含子长度变短，导致调控元件的积极响应，是引起 PAL 的表 达增强，使得木质素含量增加，导致褐色果皮形成的原因之一。 关键词：基因克隆；苯丙氨酸解氨酶；大果水晶梨；基因表达 ABSTRACT Compared Suisho pear with its brown peel mutant, there is a cork layer in mutant Suisho pear. Lignin of the cork layer is the polymer of phenolic compounds synthesized via phenylpropanoid pathway. Phenylalanine ammonia-lyase (PAL) is the first key enzyme in the phenylpropanoid pathway. Therefore, the study of pal has an important role in the formation of brown peel mutant of Suisho pear. The leaves of normal and mutant Suisho pears were used to extrate DNA,which were used to clone pal. The peels of mutant and normal Suisho pears in different fruit growth stage (young fruit stage, fruit dot browning stage and pericar