猴泡沫病毒(sfv)检测方法的建立与初步应用-免疫学专业论文 word格式.docxVIP

猴泡沫病毒(sfv)检测方法的建立与初步应用-免疫学专业论文 word格式.docx

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猴泡沫病毒(sfv)检测方法的建立与初步应用-免疫学专业论文 word格式

AbstractSimianFoamyVirus(SFV)belongstoretrovirusfamily,foamretrovirussubfamily.Itis aretroviruswhichissimilartothesimian immunodeficiencyvirus(SIV).SFVisnotpathogenicinnonhumanprimates,butthespreadbetweenspeciescancausepathogenic changes.The monkeywas usedina varietyofdisease modelsas animportantanimalmodel,andalsofortheproductionofassociatedbiologicalproducts.Therefore,itisimminenttofurtherimprovequalitycontroloftheexperimentalmonkeys.Invirusdetectionlevelstandardsoflaboratoryanimals,thesimianfoamyvirusisapathogenthatcleananimalsshouldbeexcluded.Currently,whole-viruspackageELISAandPCRmethodswascommonlyusedtodetecttheSFV infection.Butthedetectionrangeofexistingmethodsislimitedandtheprocessis morecomplex.WeattemptstoestablishSFVdetectionmethodsfromtwoaspects,oneaspectismolecularbiology,theestablishmentofSFVnucleicaciddetectionmethodwithPCRandfluorescencequantitativePCR;theotheroneisserology,thesynthesisofrecombinantproteininsteadofSFVantigenisusedtodetecttheserumSFV antibodiesandtheestablishmentofsimianfoamyvirusindirectimmunofluorescenceassay.Meanwhile,theestablishedmethodswasusedinrhesusandrelatedbiologicalproductsdetection,toverifyitsvalueforpracticalapplications.AccordingtoSFV-1genomesequencepublishedonNCBI,themurineleukemiavirus(MuLV),humanimmunodeficiencyvirus(HIV)andotherretroviruses’genomesequencewerecomparedwithSFV-1toidentifydifferentsectioninsequence,andthenprimersweredesigned.Four primerswerescreened,ofwhichasetofPCRprimersandthreesetsofRT-nestPCRprimers.Toverifytheprimer’sspecificity,takemurine leukemiavirus(MuLV),humanimmunodeficiencyvirus(HIV),measles,mumps, normalBHK-21cellsascontrols.Weusethesevirus’cDNAastemplateseparately,thereisabandwiththepredictedmolecularweightwhenSFVcDNAisused.Itshowsthespecificityoftheassay.Comparedthesensitivityoffourprimers,aRT-nestPCR primer isthe most sensitive one.The minimumdetectable titer was106.3TCID50,theminimumconcentrationofnucleicacidwecandetect is0.26pg/μL.The10-foldserialdilutionplasmidpGEM-TEasy-SFVpolwasuseda

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