生物化学王镜岩第三版第五篇章蛋白质的共价结构课件.pptVIP

消化道内几种蛋白酶的专一性 （Phe.Tyr.Trp） （Arg.Lys） （脂肪族） 胰凝乳蛋白酶 胃蛋白酶 弹性蛋白酶 羧肽酶 胰蛋白酶 氨肽酶 羧肽酶 （Phe. Trp） 泛用酶： 胰蛋白酶（trypsin）； Lys-X, Arg-X (X≠Pro) 胰糜乳蛋白酶（chymotrypsin）；Y-X（Y=Phe,Trp,Tyr; X≠Pro) 嗜热菌蛋白酶（thermolysin）； 木瓜蛋白酶（papain）； X-Y (X=R, K,Q, H, Y) 胃蛋白酶（pepsin）； 枯草杆菌碱性蛋白酶（subtilisin） 专一酶： Lys-X; X-Lys; Arg-X; Glu-X; X-Asp; Pro-X; Asn-X , 商品名：Endoproteinase Asn-C 肽键的专一性水解(酶法) 酶法专一性水解 太短在多肽链中次序的决定 资料：N-末端残基H,C-末端残基S; 第一套肽段 第二套肽段 OUS SEO PS WTOU EOVE VERL RLA APS HOWT HO 借助重叠肽确定肽段次序： 末端残基 H S 末端肽段HOWT APS 或 OUS 第一套肽段：HOWT OUS EOVE RLA PS 第二套肽段：HO WTOU SEO VERL APS 推断全序列: HOWTOUSEOVERLAPS 二硫键的断裂：几条多肽链通过二硫键交联在一起。可在可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的?-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，以防止它重新被氧化。 可以通过加入盐酸胍方法解离多肽链之间的非共价力；应用过甲酸氧化法或巯基还原法拆分多肽链间的二硫键。 胰岛素 ?-巯基乙醇 碘乙酸 二硫键的断裂 确定原多肽链重二硫键的位置： 一般采用胃蛋白酶处理没有断开二硫键的多肽链，再利用双向电泳技术分离出各个肽段，用过甲酸处理后，将每个肽段进行组成及顺序分析，然后同其它方法分析的肽段进行比较，确定二硫键的位置。 二硫键的切割与保护 1、过甲酸〔performic acid〕 不可逆 －CH2SO3H 2、还原＋烷基化 不可逆 [ 巯基乙醇，DTT ] ＋ 碘乙酸等 －S-CH2-COOH 二硫键的保护 第五章 蛋白质的共价结构 1952年丹麦人Linderstrom-Lang最早提出蛋白质的结构可以分成四个层次: primary structure 一级结构： 氨基酸序列 secondary structure 二级结构： α螺旋，β折叠 tertiary structure 三级结构：所有原子空间位置 quanternary structure 四级结构： 蛋白质多聚体 1969年正式将一级结构定义为氨基酸序列和双硫键的位置。 介于二级结构和三级结构之间还存在超二级结构（二级结构的组合）和结构域（在空间上相对独立）这两个层次。 蛋白质的结构层次 蛋白质结构层次 肽基的C、O和N原子间的共振相互作用 共振产生的重要结果：?限制绕肽键的自由旋转 ?形成酰胺平面 ?产生键的平均化 ?肽键呈反式构型 sp2 sp2 sp2 sp3 共振杂化体 历史上第一个被确定氨基酸序列的蛋白质胰岛素insulin 胰岛素的历史 第一个生化药物 最小的蛋白质，由A链(21 AA)和B (30 AA)组