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微生物的菌种保藏方法 斜面冰箱保藏法：将菌种接在新鲜斜面培养基上，定温培养长出丰满菌苔后，一般形成芽孢的细菌要形成芽孢，形成孢子的微生物要长出孢子，贴上标签，放在试管架上，在棉塞部位用尼龙紙或防水紙包好，放入4℃ 冰箱中保藏。一般每隔3个月至半年用新鲜培养基移植1次。方法简便，实验室均采用。 缺点：移接代数太多，易产生变异、退化。 石蜡封藏法：在已长好的斜面菌种上加入无菌液体石蜡油，高出斜面1cm直立试管放入冰箱保藏，适用保存细菌和放线菌。 石蜡的处理：250mL三角瓶装100mL液体石蜡，1.05kg/cm3高压灭菌30min，然后放在105℃ 左右的烘箱中1h，使水分蒸发掉。 砂土管保藏法：(可用于保藏产孢子的放线菌、霉菌和产芽孢的细菌）。 1.砂土管的制备：取河沙若干，用40目过筛，出去大颗粒，加10%HCl后煮沸30min，除去有机质（也可用10%HCl浸泡2—4h)。最后倒去酸水，用自来水冲洗至中性，烘干备用。另取0.3m以下非耕作层的瘦黄土若干，晒干磨细，过120目筛。 2.按 土：砂＝1：4 的比例均匀混合，装入指形管中，以1cm高为宜，塞上棉塞，160～170℃干热灭菌2h。 3.在新鲜菌种斜面上加入3mL左右的无菌水，用无菌接种环制成菌悬液，用无菌吸管吸取0.2～0.3ml的菌悬液放入每个砂土管中，用接种环拌匀，并贴上标签，注明菌名。 4.菌液加好后，立即进行抽真空干燥，要求在24h内抽干，尤其是夏天要求较短时间内抽干。摇散砂土，放干燥器内冰箱保藏。 冷冻真空干燥保藏法：此法一般常用于细菌或病毒一类的菌种保藏，常用脱脂牛奶或血清作为菌种的保护剂。 1. 脱脂牛奶的制法：将牛奶加热到80℃左右，然后冷却，除去表面的一层脂肪。这样反复2—3次后用脱脂棉花过滤，并在3000r/min的离心15min，再除去表面脂肪。将脱脂牛奶装入三角瓶中，用0.5kg/cm2高压灭菌30min，连续2次，并作无菌试验。 2. 用无菌的脱脂牛奶将新鲜斜面菌种制成牛奶菌种悬液，无菌操作装入安瓿管中（装量不超过其体积的1/3)。 3. 预冻：将分装好的安瓿管在－25～－40℃ 之间的干冰酒精中进行预冻，1h后即可抽气进行真空干燥。 4.真空干燥：预冻后放入真空干燥箱中，开启真空泵进行干燥。 5.封管前将安瓿管装入多歧管上，开启真空泵，当真空度达到0.01mm汞柱后用火焰熔封。 6.做好的安瓿管放入冰箱中保藏。 实验程序5 （四大类微生物菌落形态的比较和识别） 区分和识别各大类微生物通常包括菌落形态（群体形态）和细胞形态（个体形态）两方面的观察。 菌落形态： 菌落表面湿润：细菌——薄而小，酵母菌——厚而大。 菌落表面干燥：放线菌——密而小，霉菌——松而大。 气味 细胞形态： 细菌——小而分散 酵母菌——大而分散 放线菌——
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