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Purification of keratinase KerF Recombinant KerF was purified to electrophoretical homogeneity after nickel affinity chromatographyand exhibited a high specific activity of 726U/mg. 重组角蛋白酶的纯化 重组角角蛋白酶末端含有His标签，可采用镍亲和层析法快速纯化。对纯化的角蛋白酶进行蛋白含量测定和酶活测定，得出重组角蛋白酶比酶活力达到26U/mg。 Analysis of recombinant expressed keratinase by SDS. M, Marker; 1, purified keratinase; 2, recombinant strain pET28-kerF lysate induced by IPTG Optimum temperature and thermal stability of keratinase Ker Effect of temperature on enzyme activity Effect of temperature on enzyme stability KerF角蛋白酶的最适作用温度和温度稳定性 在pH 7.4，反应30 min的条件下，于25～75 ℃范围内，每隔5℃，分别测定酶活，以酶活最高为100%计算相对酶活，由此确定酶的最适作用温度。将酶液于30、35、40、45、50、55℃下保温处理不同时间，测定残余酶活性。以未保温（4℃放置）的酶样活性为100%，由此确定酶的热稳定。 Optimum pH and pH stability of keratinas KerF The optimum pH was determined at 30℃using the following buffers：Acetic acid/sodium acetate buffer (pH 4.2 ～ 5.4), Tris-HC1 buffer(pH 6.0～8.4), and Glycine/NaOH buffer (pH 9.0～9.6)． The enzyme solution was preincubated for 30min in different pH buffer .Then the residual activity was measured． Effect of pH on enzyme activity Effect of pH on enzyme activity Effect of pH on enzyme activity KerF角蛋白酶的最适pH值及pH稳定性 Effect of pH on enzyme activity Effect of pH on enzyme activity Effects of pH on enzyme activity Effect of pH on enzyme stability Effect of pH on enzyme stability Effect of metal ions on keratinase KerF activity Metal ions Concentration （mM） Relative activity（%） None - 100 K+ 5 75.61 Cu2+ 5 0 Na+ 5 58.54 Mn2+ 5 0 Co2+ 5 0 Mg2+ 5 0 Ni+ 5 0 Ba2+ 5 0 Zn2+ 5 0 Ca2+ 5 0 Fe2+ 5 0 Fe3+ 5 0 金属离子对KerF角蛋白酶活性的影响 Effect of proteinase inhibitors and organic solvent on keratinase activity Protease inhibitors, organic solvents Concentration （mM,%） Relative activity（%） None - 100 PMSF 1 51.22 PMSF 5 0 EDTA 1 248.78 EDTA 5 226.83 Methanol 1% 80.09 Ethanol 1% 100 Isopropanol 1% 100.45 有机溶剂、蛋白酶抑制剂等对KerF角蛋白酶活性的影响 Effect of sulfur compounds on keratinase activity Sulfur compo
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