免疫原和抗血清的制备讲义.pptVIP

分离亚细胞成分最常用的方法是 A 凝胶过滤法 B 低速离心法 C 超速离心法 D 选择性沉淀法 E 高速离心法 配制绵羊红细胞免疫原一般细胞浓度为 A 103∕ml B 104∕ml C 105∕ml D 106∕ml E 107∕ml 颗粒性抗原免疫接种的方法通常采用 A 皮下注射 B 淋巴结注射 C 肌肉注射 D 皮内注射 E 静脉注射 免疫球蛋白片段的制备 免疫球蛋白具有抗体活性，五类免疫球蛋白都能用纯化的方法提取出来。 将其分解成片段，如Fab段、Fc段和轻链等作为免疫原制备抗血清，能制得分辨能力更高的特异性抗体，制备方法如下： 免疫球蛋白片段的制备： 非共价键解离法－改变pH 、利用强变性剂 共价键解离法－氧化法和还原法 溴化氰裂解法 酶解法－木瓜酶 、胃蛋白酶 酶裂解法 酶对免疫球蛋白的水解有极好的专一性。 如木瓜蛋白酶可将IgG裂解成一个Fc和两个Fab片段；胃蛋白酶可将水解成F（ab’）2和数个小片段；胰蛋白酶将IgG切成不规则肽链。 用木瓜酶水解得到的Fc段作为抗原制备重链血清，胃蛋白酶水解抗体试剂用。 （三）纯化抗原的鉴定 蛋白含量测定：紫外吸收法、双缩脲法、酚试剂法 分子量测定：SDS、凝胶过滤 纯度鉴定：醋酸纤维膜电泳、SDS、毛细管电泳、等电聚焦、高效液相层析 免疫活性鉴定：双向免疫扩散、免疫电泳、ELISA 三、半抗原性免疫原的制备 半抗原(hapten)：仅有抗原性而无免疫原性的物质如多肽、甾体激素、核苷、某些药物等 载体(carrier)：赋予半抗原以免疫原性的物质 ①蛋白质：牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白 牛甲状腺球蛋白 血蓝蛋白 ②多肽聚合物：多聚赖氨酸（polylysine） ③大分子聚合物：羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose, CMC) 　　　　 聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrrolidone,PVP） （一）载体 ①物理方法：利用通过电荷和微孔吸附半抗原 吸附的载体有CMC、PVP、硫酸葡聚糖等 （二）半抗原与载体的连接方法 ②化学方法：利用某些功能基团将半抗原连接到载体上 带有游离氨基或羧基以及两种基团都有的半抗原：碳二亚胺法 戊二醛法 混和酸酐法 过碘酸氧化法 不带氨基和羧基的半抗原：用化学方法使其转变为带有游离氨基或游离羧基的衍生物，再与载体连接 （三）半抗原性免疫原的鉴定 一个载体分子至少要连接20个以上的半抗原分子 半抗原与载体的比例测定： 吸收光谱分析法 放射性核素标记半抗原渗入法 制备人工抗原时，最常用于偶联半抗原的载体是 A 牛血清白蛋白 B牛甲状腺球球蛋白 C 人血清白蛋白 D 人甲状腺球蛋白 E 兔血清白蛋白 第二节 免疫佐剂 免疫佐剂：那些与抗原一起或先于抗原注入机体后，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答的类型的物质称为免疫佐剂,简称佐剂. 非免疫原性的佐剂:氢氧化铝、磷酸铝、磷酸钙、石蜡油、羊毛脂、表面活性剂、藻酸钙、人工合成的多聚肌苷酸和胞壁肽。 具有免疫原性的佐剂:如卡介苗、枯草分支杆菌、短小棒状杆菌、百日咳杆菌、革兰氏阴性杆菌内毒素（脂多糖）和细胞因子。 用于人体的佐剂：氢氧化铝、明矾、poly I∶C、胞壁酰二肽、细胞因子、热休克蛋白 常用于动物实验的佐剂：弗氏佐剂(Freund’s adjuvant) 一、佐剂的种类 弗氏佐剂(Freund,s adjuvant)： 弗氏完全佐剂－羊毛脂与液体石蜡的混合物 弗氏不完全佐剂－弗氏完全佐剂加卡介苗 乳化方法： 研磨法和搅拌混合法 细胞因子佐剂与抗原合用，可以更有效激发机体免疫功能，增强免疫反应。 白细胞介素2（IL－2）、IL－1、干扰素、粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（CSF，GM－CSF）具有佐剂作用。 抗寄生虫或肿瘤疫苗研究应用中，在细胞因子佐剂辅助下，刺激机体产生具保护作用的细胞免疫。 一、佐剂的种类 1、增强免疫原性 使弱免疫原性物质变成持久或强的免疫原。 2