环境工程微生物学-微生物污染及其检测技术汇.pptVIP

表 3 浮游菌最小采样量 浮游菌上限浓度 ／个 · m-2 · min-1 计算最小采样量／m3 10 5 1 0.5 0.1 0.05 0.3 0.6 3 6 30 60 表4 落菌法测细菌所需要的最少培养皿数(沉降0.5h) 含尘浓度最大值 需要d90mm培养皿数 0.35 3.5 35 350 3 500~35 000 40 13 4 2 1 第二节 水质的细菌学检验 一、细菌总数 将定量水样（原水样或稀释水样1mL）接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板 37oC培养24hr后观察结果，计菌落数， 计算原水样每毫升的细菌总数。 具有相对的卫生学意义： 菌数越高，水体受有机物污染或粪便污染越重，病原菌污染的可能性亦大（为什么？）。 二、粪便污染指示菌 人畜粪便中常常带有大量的微生物，水质的卫生学检验，对于保护人群健康，具有重要意义 有些属于正常的、对人体无害的肠道微生物， 有些则是病原微生物，进入水体后，可造成水体的污染，从而引发各种肠道疾病。 致病菌数量少，直接检测复杂，选用间接指标即粪便污染指示菌为代表。 以肠道正常细菌在水中的存在及数量作为粪便污染的指示。 健康成人粪便内的微生物数量 微生物名称 每克粪便中平均生长菌落数 主要微生物 ? 拟杆菌属 1010 乳酸杆菌属 109 大肠埃希氏菌属 108 粪链球菌 108 次要的微生物 ? 柠檬酸杆菌属 105-106 梭菌属 105-106 葡萄球菌属 105-106 克雷伯氏菌属 104-105 肠杆菌属 104-105 芽孢杆菌属酵母属 104-105 霉菌 104-105 较少的微生物 ? 变形菌属 102-103 铜绿假单胞菌属 102-103 （一）指示菌的理想条件 大量存在于人的粪便，数量比病原菌多； 受粪便污染的水中易检测出，未受污染的水中无检测； 在水体中不会自行繁殖； 存活时间略长于致病菌，对消毒剂的抵抗略强于致病菌； 检出及鉴定方法比较简易迅速； 适用于各种水体。 （二）适宜的指示菌 总大肠菌群， 粪大肠菌群、 大肠杆菌埃希氏菌（大肠杆菌） 克雷伯氏菌属。 三、大肠杆菌 （一）特征 大肠杆菌定义： 一群需氧或兼性厌氧性的G-无芽孢杆菌，37oC培养24hr，能发酵乳糖产酸产气。包括了粪便内全部兼性需氧性G-杆菌，以大肠杆菌埃希氏菌属为主，以及柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等。 成人粪便排出菌数可达(5~100)×106 cfu/d。 （二）大肠菌群的测定 常用多管发酵法或滤膜法。 发酵法：又称多管发酵法或三步发酵法 初发酵（推测试验） 将不同稀释度的水样，分别接种于含乳糖等糖类的培养液(3倍或1倍乳糖液), 37oC培养24hr，观察产酸产气情况， 初步判断是否有大肠菌群存在。 2）平皿分离（证实试验） 水中其它细菌有可能引起糖类发酵，因此需要进一步证实。 初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基或远藤氏培养基上，37oC培养24hr， 根据菌落特征，挑取大肠菌群疑似菌落制片， 革兰氏染色证实是否为大肠菌群。 3） 复发酵试验（完成试验） 将大肠菌群疑似菌落再次接入1倍乳糖液，37oC培养24hr，产酸产气者即确证为大肠菌群。 结果计算 产酸、产气记为阳性反应， 不产酸、不产气记为阴性反应。 根据阳性管数量，查表计算水体大肠菌群数量。 2 滤膜法 发酵法检测需要时间较长，为缩短时间，可以采用滤膜法，其步骤为： 1）水样过滤：选用微孔滤膜，灭菌后抽滤一定量的待测水样，将水中的细菌截留在无菌滤膜上； 2）培养：将滤膜有菌面朝上贴于伊红美兰培养基或远藤氏培养基，经37oC培养16hr~18hr； 3）结果观察： 培养16hr~18hr后，挑选深红色或紫红色、不带或带有金属光泽的菌落，或者淡红色、中心色较深的菌落进行革兰氏染色观察，确定大肠菌群细菌。 G- ：接入乳糖培养液中，复发酵； G+：阴性结果。 经染色证实为G-无芽孢杆菌者，再接入乳糖蛋白胨半固体培养基中，37oC培养6~8hr，产气者判定为大肠菌群阳性。 4）结果计算： 根据滤膜上的大肠菌群数及滤过水量，求出1L水中大肠菌群数量。 计算公式： 总大肠菌群数 = 滤膜上的菌落数以20~60个/片为适宜。 5）评价报告： 根据测定的数值写出检测水样的细菌学检测结果，予以评价。 滤膜上生长菌落数 × 1000 过滤水样量（mL） 滤膜法的优点： 省时、省料、设备要求低； 可以采集较多的检验水样。 局限性： 易受悬浮物干扰； 受其它细菌的干扰； 受水样