生物工程制药之酶工程制药8.pptVIP

* 2）内扩散阻力是指底物分子达到固相酶表面后传递到酶活性部位时的一种扩散阻力，它与催化反应同时进行。 载体小而弯曲的细孔是产生内扩散阻力的主要原因。因此使用低分子量底物，小粒径、载体孔尽可能大而且互相连通，或仅仅将酶固定在载体表面都可以降低这种内扩散阻力。 酶工程制药 酶工程制药 4.5固定化酶（细胞）性质的改变 4.5.1、固定化酶的活力在大多数情况下比天然酶下降，其专一性也会受影响发生改变。 活力下降的原因： ? 酶分子在固定化过程中，酶的空间构象变化， 甚至活性中心的氨基酸也会参加反应。 ? 固定化后的空间障碍效应的影响。 ? 内扩散阻力的影响使底物分子与活性中心的接近受阻。 ? 包埋法时被高分子物质半透膜包围。 酶工程制药 4.5固定化酶（细胞）性质的改变 4.5.2、固定化后酶稳定性提高 稳定性提高的原因： ? 固定化后的酶与载体多点连接，可防止酶分子 伸展变形。 ? 酶活力的缓慢释放。反应开始只有部分酶起作 用，其余部分在开始起作用的酶变性后才起 作用。 ? 抑制自降解，提高了酶稳定性。 酶工程制药 4.5固定化酶（细胞）性质的改变 4.5.3、固定化酶（细胞）的最适pH变化 酶固定化后，对底物的最适pH曲线常常发生偏移。 一般来说，带负电荷载体制备的固定化酶，其最适pH值较游离酶偏高，即碱性偏移。反之，若使用带正电荷的载体，其最适pH值较游离酶偏低，即向酸性偏移。 酶工程制药 4.5固定化酶（细胞）性质的改变 4.5.4、固定化酶（细胞）的最适温度的变化 酶反应的最适温度是酶热稳定性与反应速度的综合结果。因为固定化后，酶的热稳定性提高，所以最适温度也随之提高，这是有利于酶反应的结果。 酶工程制药 4.5固定化酶（细胞）性质的改变 4.5.5、米氏常数Km的变化 固定化酶的米氏常数Km随载体的带电性能变化。 由于高级结构变化及载体影响引起酶与底物亲和力变化，从而使Km变化。而这种Km变化又受到溶液中离子强度影响：离子强度升高，载体周围的静电梯度逐渐减小，Km变化也逐渐缩小以至消失。 酶工程制药 4.6 固定化酶（细胞）的活力 固定化酶的活力即是固定化酶催化某一特定化学反应的能力。其大小可以用在一定条件下它所催化的某一反应的反应初速度来表示。 它的单位可定义为每毫克干重固定化酶每分钟转化底物的量： 用μmol/ min ·mg 或μmol·min-1/cm 2 4.6.1活力测定方法分为： 间歇测定：在搅拌或振荡反应器中，在与溶液酶同样测定条件下进行，然后间隔一定时间取样，过滤后按常规进行测定。 连续测定：固定化酶装入具有恒温水夹套的柱中，以不同流速流过底物，测定酶柱流出液，根据流速和反应速度之间关系，算出酶活力。 酶工程制药 4.6 固定化酶（细胞）的活力 4.6.2固定化酶的活力回收 活力回收= ×100% 4.6.3固定化酶（细胞）的半衰期 在连续测定条件下，固定化酶的活力下降为最初活力一半所经历的连续工作时间称为固定化酶的半衰期。以t1/2表示。 固定化酶的操作稳定性是影响使用的关键因素，半衰期是衡量稳定性的指标。 酶工程制药 4.7固定化酶反应器 酶工程制药 4.7.1批量式搅拌桶式反应器 Batch Stirred tank reactor ,BSTR 结构简单，不需要特殊设备，适于小规模实验。当前食品和饮料工业有采用这种形式反应器。一般应用溶液酶或粗酶制剂催化，酶不回收，待反应转化至一定程度后，通过加热或其他方法直接使之失效除去。但在反复过滤或离心回收过程中，易造成酶的失效损失。工业上很少用. 酶工程制药 4.7.2连续流搅拌桶式反应器 Continuous Stirred tank reactor,CSTR 催化剂采用颗粒状的固定化酶，少数应用片状固定化酶。运转过程中要不断分出部分反应液，同时补充等量的新鲜底物溶液，为不致使酶随反应液流失，所以在它的出口处通常有滤膜。利于有底物抑制场合. 酶工程制药 4.7.3连续搅拌桶式超滤反应器 CSTR/Ultrfitration reactor,CSTR/UFR 由连续流搅拌桶式反应器和超滤装置组合而成，为小分子量产物与高分子底物的分离、底物较彻底的转化以及溶液酶或固定化酶的反复使用提供了可能。但酶易因循环超滤而失效损失。 酶工程制药 4.7.4填充式反应器 Plug Flow reactor,PFR