基因工程补充1 .pptVIP

补充 * 载体DNA用Bam HⅠ切割 同一限制酶切位点连接 GGATCC CCTAGG Bam HⅠ切割反应 + 目的基因用 Bam HⅠ切割 载体DNA用Bam HⅠ切割 G CCTAG GATCC G 载体DNA用Bam HⅠ切割 目的基因用 Bam HⅠ切割 T4 DNA连接酶 15oC 重组体 载体自连 目的基因自连 * 议一议 2、能否用SARS病毒作为基因载体？ 3、作为载体，若没有切割位点将怎样？ 4、携带目的基因的载体是否进入了受体细胞，如何鉴定？ 5、假如目的基因导入受体细胞后不能复制，将怎样？ 1、从化学本质来看，载体应该是什么？ 双链DNA 不能 不能进行DNA的重组 载体上应有标记基因 可能造成基因丢失 * “λ噬菌体的衍生物”的解释 由于野生型λ噬菌体DNA对大多数目前在分子克隆中 常用的限制酶有多个切点，而且有些位点恰巧定位于 与噬菌体生长繁殖关系密切的必需基因之中， 这些位点的剪切重组必然严重影响噬菌体的繁殖。 因此野生型λDNA不能直接用作载体而需经过改造才能 成为有价值的克隆载体。天然λ噬菌体载体改造的关键 是去除或改变其基因组必需区段内多余的限制酶切位点。 改造方法包括点突变、基因组的置换和缺失。 由天然λ噬菌体改建获得的就是λ噬菌体的衍生物。 * p7 思考与讨论： 1。提示：不能。因为一般基因有上千个碱基对 2.提示：可能是剪切位点或连接位点选得不对（也可能是其他原因） * 补：原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。 转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。 转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。 * ①不能转录为信使RNA，不能 编码蛋白质。 ：能转录相应的信使RNA，能 编码蛋白质 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②有调控遗传信息表达的核 苷酸序列，在该序列中， 最重要的是位于编码区上 游的RNA聚合酶结合位点。 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 启动子 终止子 * 补：真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： * 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用的核苷酸序列， 包括位于编码区上游的RNA 聚合酶结合位点。 非编码序列： 包括非编码区和内含子 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 * 2.基因文库的构建方法 供体细胞中的DNA 许多DNA片段 运载体 限制酶 与载体连接 载入 受体细胞 产生特定性状 导入 外源DNA扩增 目的基因 分离 (一)从基因文库中获取目的基因 一、目的基因的获取 基因工程的基本操作程序 ①鸟枪法(直接分离法) * 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 目的基因的mRNA 单链DNA 反转录酶 DNA聚合酶 双链DNA (目的基因) 2.基因文库的构建方法 (一)从基因文库中获取目的基因 一、目的基因的获取 基因工程的基本操作程序 ②反转录法 *