微生物的培养与利用实验复习.pptVIP

* * 1、微生物及类型 2、微生物的培养和分离 3、某种微生物数量的测定 4、培养基对微生物的选择作用 5、利用微生物发酵来生产特定的产物 6、发酵过程中硝酸盐含量的测定 微生物的培养与利用 一、微生物及类群 二、微生物的培养和分离 （一）培养基的配制 1、培养基成分： 碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）、水和无机盐、适宜的pH、特殊营养物质（如维生素）等，如配制固体培养基，还需加入凝固剂琼脂。 微生物是形体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物，包括病毒、原核生物、原生生物及真菌。 无细胞结构寄生的分子生物 真核 2、固体培养基的配制过程 计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 加蒸馏水定容至1000mL （二）无菌技术 1、消毒： 酒精消毒、氯气消毒水源等。 2、灭菌 高压蒸气灭菌 干热灭菌 灼烧灭菌 ：对接种工具灭菌。 （三）微生物接 种方法 平板画线法 涂布平板法 ：用接种环在培养基上画线。 ：用涂布器在培养基上均匀涂布稀释菌液。 提供碳源、氮源、磷酸盐与维生素 三、某种微生物数量的测定 1、测定微生物数量的方法 （1）直接计数法：显微镜下直接观察和计数，但不能区分细菌的死活。 （2）间接计数法：常用稀释平板计数法，培养基中菌落数就是接种的活细菌数。 2、实例： （1）培养基： （2）操作过程： →观察菌落并计数 一般用10-4、10-5、10-6倍稀释液进行平板培养 用无菌水 取土壤制样液 →样品稀释 涂布平板并培养 怎样算结果？ 土壤中分解尿素的细菌分离与计数。 含有尿素的固体培养基。 四、培养基对微生物的选择作用 1、利用分离对象对某一营养的“嗜好”的原理，在培养基中加入该营养物质，从而使其大量繁殖，如纤维素分解菌的筛选分离时培养基加纤维素粉。 2、利用选择培养基筛选微生物。 选择培养基：在培养基中加入或减少某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。 实例：（1）加青霉素培养基分离酵母菌、霉菌及青霉素抗性细菌，而抑制一般细菌的生长。 （2）培养基中缺乏氮源，可分离出固氮微生物。 3、利用培养环境条件选择微生物：如缺O2环境培养厌氧微生物。高温环境筛选出耐高温的微生物。 基因工程中应用 五、利用微生物发酵来生产特定的产物 （一）果酒和果醋的制作 1、原理： （1）果酒制作：酵母菌兼性厌氧，进行无氧呼吸产生酒精，酵母菌可在缺氧、呈酸性的环境生长，而其他微生物无法生长。 （2）果醋制作：醋酸菌为好氧菌，在氧气充足时，能将糖氧化为醋酸，没有糖源时，将乙醇氧化为醋酸。 2、实验过程： 挑选葡萄→冲洗→榨汁 酒精发酵 醋酸发酵 果酒 果醋 （无氧） （有氧） （二）腐乳的制作 1、原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶将豆腐中的蛋白质分子分解成肽和氨基酸，脂肪酶将脂肪等水解为脂肪酸，多种微生物的协同作用下形成独特风味的腐乳。 2、实验过程 让豆腐长出毛霉 加盐腌制 加卤汤装瓶 密封腌制 六、发酵过程中硝酸盐含量的测定 原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。将显色后的样品与已知浓度的标准显色液进行目测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐含量。 10g土样 90mL无菌水 1mL 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 1mL 1mL 1mL 1mL 9mL无菌水 104 104 104 0.1mL 105 105 105 0.1mL 106 106 106 0.1mL