酶工程第17章兰州大学酶工程酶在医学方面的应用精选.pptVIP

ELISA设备 酶标仪 全自动酶标仪 全自动洗板机 酶标板 * 测抗体 将纯化的抗原固定到微孔板的孔中，加入不同稀释度的抗血清，待测抗体即和固定的抗原结合，洗涤后，加入酶标的二抗（抗抗体），再洗去未结合的多余酶标二抗，加底物显色、比色，色度与抗体的量成正相关。 * 非均相反应测抗体 酶标抗抗体 待测抗体 固定抗原 * 测抗原 a. 双抗夹心法：将抗体固定到微孔板的孔中，加入待测抗原，待测抗原与固定的抗体结合，再加入酶标抗体，酶标抗体与待测抗原结合，洗去未结合的多余酶标抗体，加底物显色，比色，色度与待测抗原的量成正相关。若上述酶标抗体换成非酶标抗体（必须与固定抗体不同，如分别为鼠和兔来源），洗涤后再加上酶标二抗，可提高检测的灵敏度。此法只适合于测定具有两个以上抗原决定簇的抗原。 * 双抗夹心法测抗原 酶标抗体 固定抗体 待测抗原 固定抗体（兔） 一抗（鼠） 酶标二抗 （羊抗鼠） * 测抗原 b. 竞争法Ⅰ：将抗体固定到微孔板的孔中，再加入待测抗原和一定量的酶标抗原，两种抗原竞争与固定抗体结合，待测抗原多则结合上去的酶标抗原少，色度与待测抗原量成反相关。 竞争法适合于测定只具有一个抗原决定簇的抗原。 * 测抗原 c. 竞争法Ⅱ：让游离的待测抗原和抗体在试管中反应，然后加到固定有纯化抗原的微孔板的孔中，待测抗原多则结合到固定抗原上的抗体少，洗涤后加入酶标二抗。色度与待测抗原成反相关。 在非均相反应中，因有多次洗涤过程，待测抗原中若有酶的可逆抑制剂，影响不大。 * （3）标记酶的选择 采用标记酶有放大作用，因为每一个酶分子可以催化许多底物转化成产物。理想的标记酶要有下列特点： a. 在抗原—抗体结合的最适pH条件下，酶有高的比活性； b. 酶有一些可供共价偶联的反应基团，与抗原或抗体偶联后酶活性损失很小； * 标记酶的选择 c. 酶活性不受测定液中各种因素的影响，抑制剂标记抗原的影响除外； d. 酶反应的产物为有色物质，颜色稳定，便于比色检测； e. 价廉（包括酶、底物）； f. 底物、酶、产物对人无害。 * 常用的标记酶 常用的标记酶有过氧化物酶，它价格便宜，是糖蛋白，可以用高碘酸活化法与抗原或抗体偶联。防腐剂、氧化剂、还原剂会使该酶失活，所以反应体系中不能含有这些物质。用比色法可以测出皮摩尔水平的酶，最灵敏的底物是邻苯二胺（同时加H2O2），但其具有光敏性，应在弱光下使用。另一种常用的标记酶是碱性磷酸酶。 * 药用酶的体外应用 配合体外循环装置将酶固定在微囊、玻璃球、尼龙管、纤维素、胶原蛋白等上面，安装在透析器内，解决异体蛋白在体内引起的过敏问题。 * 人工肾 人工肾是体外循环装置中最成功的代表。它是利用体外循环将患者的血液通过透析器除去代谢废物（如尿素）后重新返回体内的一种装置。老式的人工肾需要体积庞大的透析液，既不经济又不方便。1968年，T.M.S.Chang加以改进，将通过透析器的含尿素的透析液用泵输入到一个玻璃柱内。柱的一端装有尿素酶微囊，另一端装有活性碳或离子交换剂。当透析液通过玻璃柱时，其中的尿素受尿素酶作用转变为二氧化碳和氨，氨被活性碳吸附，二氧化碳回到血中由肺排出体外。 * 人工肾 活性碳也能除去血液中的其它废物。整个装置可以降低血液中的尿素达80％。此装置的优点是体积小型化，透析液可以循环使用，使人工肾成为实用化的一种医疗器械。 * 药用酶在体内的分布 根据酶微囊颗粒的大小，可以使微囊集中在某一器官或组织。用人白蛋白制成的酶微囊，直径在15～30μm以上，静注时可通过心脏，进入肺部微血管，在此可集中99％的酶。如果是直径为1～3μm的微囊，则静注后可到达网状内皮系统，在此可集中90％的酶。再小于1μm的颗粒则可在肝（80％）、脾（5～8％）、骨髓（1～2％）中依比例分布。 使微囊表面带上特殊物质（抗体、可识别物质）与特定组织细胞表面的抗原或受体反应，达到定向给药的目的。 * 二、诊断用酶 诊断用酶是用来检测体内某些与疾病有关的代谢物质或与疾病有关的酶活性变化，从而诊断病情。酶法检测有快速、简便、正确、灵敏等优点，因而发展很快。对诊断用酶的要求比药用酶低些，因其不用于体内，可以不考虑其抗原性和毒性；对纯度的要求是只要不含有能干扰所需反应的物质即可，如脱氢酶中不能含有NADH氧化酶，激酶中不能含有肌激酶，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶中不能有6-磷酸葡萄糖酸。 * 酶在疾病诊断方面的应用 酶 疾病与酶活性变化 葡萄糖氧化酶 测定血糖含量，诊断糖尿病 胆碱酯酶 测定胆固醇含量，治疗皮肤病、支气管炎、气喘；肝病时活性下降 尿酸酶 测定尿酸含量，治疗痛风 淀粉酶 胰脏、肾脏疾病时活性升高；肝病时活性下降 酸性磷酸酶 前列腺癌、