17-18版:章末整合提升:第四章 生物化学与分子生物学技术实践(步步高)
;知识系统构建;;法医;;6.PCR扩增过程中要进行无菌操作,避免污染,且向离心管中加入模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸以及TaqDNA聚合酶。
7.变性是在94 ℃高温下使模板双链DNA解旋。
8.退火是将反应体系温度降至55 ℃,使引物与模板DNA链配对。
9.延伸是将反应体系温度回升至72 ℃左右,在TaqDNA聚合酶作用下,使引物链延伸,形成互补的DNA双链。
10.DNA分子的测定:DNA分子+二苯胺试剂 蓝色物质。;;;3.醋酸纤维薄膜电泳法
(1)原理:不同的物质在同一电场中的泳动速度不同。
(2)影响因素:泳动速度主要取决于带电颗粒的性质,即颗粒的大小、形状和所带净电荷的多少。一般来说,带电颗粒直径越小,越接近于球形,所带净电荷越多,则在电场中的泳动速度越快;反之,则越慢。此外,电场强度、溶液的pH等因素对泳动速度也有影响。
(3)优点:简单、快速、分离清晰、灵敏度高、样品用量少、没有吸附现象、电泳后区带界限清晰等优点。;4.凝胶色谱法
根据蛋白质分子量的大小差异对其进行有效分离的方法。
(1)相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时,相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程较长,移动速度较慢。
(2)相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶外部移动,路程较短,移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。;
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