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第七章 酶工程制药 第一节 概 述 一、酶的特性 酶是由活细胞产生的具有特殊催化功能的一类蛋白质。其特点： ①催化效率高 ②专一性强 ③反应条件温和 ④催化活性受到调节和控制 二、酶工程简介 酶工程是酶学和工程学相互渗透结合发展而形成一门新的技术学科。它是从应用的目的出发研究酶、应用酶的特异性催化功能，并通过工程化将相应原料转化成有用物质的技术。 第二节 酶的来源和生产 一、酶的来源 早期酶的生产多以动植物为主要原料，如激肽释放酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶。工业生产一般都以微生物为主要来源。 目前使用的千余种商品酶，大多数是微生物生产的。其特点是： A、微生物种类繁多，凡是动植物体内存在的酶，几乎都年从微生物中得到； B、微生物繁殖快、生产周期短、培养简便，并可通过控制培养条件来提高酶的产量； C、微生物具有较强的适应性，通过各种遗传变异的手段，能培育出新的高产菌珠。 二、酶的生产菌 ⒈对菌种的要求 a、产酶量高，酶的性质符合使用要求，而且最好是产生胞外酶的菌； b、不是致病菌，在系统发育上与病原体无关，也不产生毒素； c、稳定，不易变异退化，不易感染噬菌体； d、能利用廉价的原料，发酵周期短，易于培养。 ⒉生产菌的来源 a、菌种保藏机构和有关研究部门获得； b、大量要从自然界中分离筛选；自然界是产酶菌种的主要来源，土壤、深海、温泉、火山、森林等都是菌种采集地。 筛选产酶菌的方法：采集、菌种的分离初筛、纯化、复筛和生产性能检定等。 菌种改良的途径：应用遗传学原理进行基因突变、基因转移和基因克隆。 ⒊目前常用的产酶微生物 A、E.coli ：是应用最广泛的产酶菌。分泌胞内酶，经细胞破碎分离得到。在工业上用于生产谷氨酸脱羧酶、天门冬氨酸酶、青霉素酰化酶、β-半乳糖苷酶。 B、枯草杆菌：主要用于生产α-淀粉酶、β-葡萄糖氧化酶、碱性磷酸脂酶。 C、啤酒酵母：用于酿造啤酒、酒精、饮料、面包等。 D、曲酶（黑曲酶和黄曲酶）：主要生产糖化酶、蛋白酶、淀粉酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶、氨基酰化酶和脂肪酶。 E、其他产酶菌：青霉菌、木霉菌、根霉菌、链霉菌等。 第三节 酶和细胞固定化 一、固定化酶的制备 ⒈固定化酶的定义： 固定化酶是指限制或固定于特定空间位置的酶，具体来说，是指经物理或化学方法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作用的酶制剂。 ⒉固定化酶的特点 具有生物催化剂的功能，又有固相催化剂的功能。 ①可多次使用 ②反应后，酶底物产物易分开，产物中无残留酶，易纯化，产品质量高。 ③反应条件易控制。 ④酶的利用效率高。 ⑤比水溶性酶更适合于多酶反应。 ⒊酶和细胞固定化方法 酶和细胞固定化方法 载体结合法 交联法 包埋法 网格型 微囊型 物理吸附法 离子结合法 共价结合法 热处理（细胞） 酶和细胞固定化模式 ⑴载体结合法：将酶结合于不溶性载体上的固定化方法。 A、物理吸附法：用物理方法将酶吸附于不溶性载体上的固定化方法。 优点：操作简单，可选用不同电荷和不同形状的载体，有可能固定化和纯化过程同时实现，酶失活后载体仍可再生 缺点：最适吸附酶量无规律可循，吸附量与酶活力不一定呈平行关系，酶与载体结合力不强，酶易于脱落，导致酶活下降并污染产物。 B、离子结合法：酶通过离子键结合于具有离子交换基的水不溶性载体上。 优点：操作简单，处理条件温和，酶的高级结构和活性中心的氨基酸残基不易被破坏。 缺点：载体和酶的结合力弱，易受缓冲液种类或pH的影响，离子强度高时，酶易脱落。 C、共价结合法：酶以共价键结合于载体上。即将酶分子上非活性部位功能团与载体表面反应基团进行共价结合的方法。 优点：酶与载体结合牢固，稳定性好，不易脱落。 缺点：载体要活化，反应条件苛刻，操作复杂，反应条件剧烈，酶易失活和产生空间位阻效应。 （2）交联法：用双功能或多功能试剂使酶与酶或细胞与细胞之间交联的方法。交联法又分：交联酶法、酶与辅助蛋白交联法、吸附交联法和载体交联法。常用的交联剂：戊二醛、双重氮联苯胺-2、2-二磺酸、1,5-二氟-2,4-二硝基苯。 （3）包埋法： A、网格型：将酶或细胞包埋在高分子凝胶细微网格中。常用合成高分子化合物有聚丙烯酰胺、聚乙烯