名校联盟浙江省桐乡市第一中学高中生物选修3-DNA重组技术的基本工具.ppt

1.1 DNA重组技术的基本工具 重点 难点 教学重点： DNA重组技术所需要3种基本工具的作用 教学难点 基因工程载体需要具备的条件 资料分析： 此转基因实验实现了哪种生物的哪些性状在另外哪种生物中表达？ 性状的表达与我们从前学过的什么过程有关？ 要实现药物基因在烟草中的表达，要提前做哪些关键工作? 学习目标 1 简述DNA重组技术所需三种基本工 具的作用 2 培养学生自己动手制作模型的能力 DNA重组技术的基本工具有哪些？ 准确切割DNA的工具（“分子手术刀”） ——限制性核酸内切酶 DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） ——DNA连接酶 基因转移工具（“分子运输车”） ——基因进入受体细胞的载体 思考 分组讨论 原核生物为什么没有在长期的进化过程中由于外源DNA的入侵而灭绝，有什么保护机制？ 限制性内切酶 黏性末端和平末端 限制酶所识别的序列有什么特点 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 阅读 总结 限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接时，是不是也有两种酶？。 3.基因进入受体细胞的载体 　　 载体必须具备的条件 如果载体对受体细胞有害将怎样？ 目的基因是否进入受体细胞，没有标记基因我们能否鉴定？ 假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ 作为载体没有切割位点将怎样？ 作为载体的必要条件 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 2、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 4、对受体细胞无害 达标练习 在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 基因工程常用的受体细胞有（ ） (1)大肠杆菌 （2）枯草杆菌 （3）支原体 （4）动植物细胞 A. （3）（4） B. （1）（2）（4） C. （2）（3）（4） D. （1）（2）（3） * * 高二生物组：贾江 生长快、肉质好的转基因鱼(中国) 乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷) 过程分析 位于费城托马斯·杰斐逊大学的希拉里和她的同事成功地将人体狂犬病抗体的DNA译码移入烟草作物中。  转基因烟草作物可以产生一种人体蛋白质，而这种物质能抗击致命性的狂犬病病毒。  导入： 　　 限制性内切酶从哪里寻找？ 1. 限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶的作用特点： 能识别特定核苷酸序列； 从特定部位的两个核苷酸之间切开。 限制酶 分组讨论： 以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，试分析： ①GC… ②AATTC… ③ …GC ④ …G CG… G… …CG …CTTAA (1)其中①和 是由一种限制酶切割形成的 末端，两者要重组成一个DNA 分子，所用DNA连接酶通常是 。 （2） 和 是由另一种限制酶切割形成的 末端，两者要形成重组DNA片段，所用的连接酶通常是 。 反馈练习： 2 .基因的针线──DNA连接酶 　　 切断的DNA片段要与受体细胞的DNA连接，你觉得可以用什么酶？ DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同和不同点？ 阅读思考： DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 连接部位 在两DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键 双链 单链 黏性末端 平末端 常用的运载体： 质粒、 噬菌体和动、 植物病毒等 不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 补救练习 *