辛伐他汀改善app转基因小鼠认知功能及体外对抗aβ损伤的线粒体机制-药理学专业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生院办理。本学位论文属于不保密口。学位论文作者签名：李盖手指导教师签名：册多月9日弘Jr年万方数据江苏大学硕士学位论文摘要目的：研究辛伐他汀(simvastatin，SV)对APP转基因小鼠认知功能的改善作用和对p淀粉样多肽(amyloid．ppeptide，Ap)损伤SH—SY5Y细胞的保护作用，并探讨其线粒体机制，为辛伐他汀应用于AD的防治提供新的理论基础和实验依据。方法：在体实验：选用3月龄的野生型(wT)和APP转基因小鼠，对其进行分组：野生型小鼠组(WT)、APP转基因小鼠组(APP)、给予辛伐他汀的野生型小鼠组(WT(SV))、给予辛伐他汀的APP转基因小鼠组(APP(SV))，然后持续给予辛伐他汀3个月，到6月龄时采用Moms水迷宫实验评价其学习记忆能力。之后部分小鼠用4％的多聚甲醛心脏灌流，取脑后固定过夜，冰冻切片机切片(25“m厚度)，Thioflavin．S染色法检测Ap斑块的沉积情况，免疫组化法检测SOD2的表达情况；另一部分小鼠被断头取脑，分离皮层和海马组织，提取小鼠皮层和海马组织的线粒体，采用H2DCF．DA荧光探针法检测ROS的含量，JC．1染色法检测线粒体膜电位，荧光素酶法检测ATP含量，Ca2+诱导的线粒体肿胀检测线粒体肿胀度，Westernblot法检测Ap、SOD2、Bcl．2、Bax、PGC．1et的表达水平；另外用透射电子显微镜观察小鼠海马CAl区线粒体和突触的超微结构，并进行统计分析。离体实验：以不同浓度(1、10、100nmol／L)的辛伐他汀预处理SH．SY5Y细胞24h，再加入ADl-42(101．tmol／L)处理24h诱导细胞损伤。采用MTT法检测细胞活性，流式细胞仪和Hoechst33342染色法检测细胞凋亡，JC．1染色法检测线粒体膜电位，荧光素酶法检测细胞中ATP含量，Clark氧电极法检测细胞的呼吸功能，MitoTrackerRed染色法检测线粒体数量，DCFH．DA荧光探针法检测细胞中ROS的含量，Westernblot法检测Bcl．2、Bax、cleaved．caspase3、cytC、核受体过氧化酶体．增殖子激活受体Y共激活因子let(PGC．1et)的表达水平。结果：Moms水迷宫检测结果显示，APP组小鼠找到平台的时间明显延长、在目标象限所停留的时间显著减少，而给予辛伐他汀的APP组小鼠找到平台的时间显著性缩短、在目标象限所停留的时间显著增加，且各组小鼠游泳速度无明显差异，这表明给予辛伐他汀能明显改善APP小鼠的学习记忆功能。但辛伐他汀对小鼠脑中Ap斑块的沉积和线粒体中Ap蛋白的水平无影响；且6月龄的APPI万方数据辛伐他汀改善APP转基因小鼠认知功能及体外对抗AB损伤的线粒体机制转基因小鼠未见明显氧化损伤；APP转基因小鼠与WT小鼠相比，线粒体的膜电位、ATP含量未见明显改变，Ca2+诱导的线粒体肿胀度结果也无显著性差异，Bcl．2、Bax、PGC．10【的表达也未见明显改变；小鼠海马CAl区线粒体和突触超微结构检测结果显示，APP组小鼠线粒体体积增大，线粒体数目不变，突触数量减少，而辛伐他汀对APP小鼠海马CAl区线粒体和突触的改变无明显影响。MTT结果表明10I．tmol／LApl．．42对SH．SY5Y细胞有损伤作用，10、100nmol／L的辛伐他汀对A131-42诱导的SH．SY5Y细胞损伤具有保护作用，能对抗Apl-42诱导的细胞凋亡，抑制线粒体膜电位的降低、ATP含量的减少、耗氧量的减少、ROS含量的增加，增加线粒体数目，促进Bcl．2、PGC．1a的表达，抑制Bax、cleaved．caspase3的表达，抑制cytC的释放。结论：辛伐他汀能改善APP转基因小鼠的认知功能，它对APP小鼠脑中Ap无明显影响。6月龄的APP小鼠未见明显氧化损伤，且皮层和海马线粒体功能未见明显改变；但APP小鼠海马CAl区线粒体体积增大，数目不变，突触数量减少，而辛伐他汀对其改变无明显影响。然而在SH．SY5Y细胞模型上，辛伐他汀能对抗Apl．．42诱导的SH．SY5Y细胞损伤，其机制可能是通过调控线粒体介导的细胞凋亡途径和保护线粒体功能、增加线粒体数目来对抗A131-42诱