糖尿病患者血管病变危险因素筛选与糖尿病胃轻瘫大鼠血管和代谢异常对胃动力的影响及药物干预-中西医结合基础专业论文.docx

糖尿病患者血管病交危险因素筛选与耱尿病胃轻瘫大鼠血管和代谢异常对胃动力的影响及药物干预鼠予糖胃康(由党参109、炒白术109、茯苓129、炙甘草69、神曲109、法半夏‘129、柴胡89、枳实109、丹参129、川芎109等组成)水煎剂灌胃：止血敏组大鼠予止血敏灌胃；蚓激酶组大鼠予蚓激酶腹腔注射；模型组和正常组大鼠予等量蒸馏水灌胃，以上三组均每周组药6次，周日不给药。所给药物剂量相当于成人临床常用剂量2倍。每天观察并记录动物一般状态(包括饮食、排泄、分泌物、毛发、精神状态、自主运动、眼白内障等、死亡等的变化)。每三周称体重一次，按新体重重新计算给三药的给药药量。于造模后第7天、第17周和第30周分别测空腹血糖一次。于大鼠DM造模后第30周，按以下步骤进行实验：所有大鼠禁食20h后，各鼠均给予5ml酚红标准溶液(1mg／m1)灌胃，30分钟后乙醚麻醉。开胸心脏取血，每组随机选约一半大鼠，取2ml血，加肝素抗凝，另取适量血液不中抗凝剂，血液凝固后分离血清，血清不少于1．5ml，．20℃冰箱保存备用，放射免疫法测血清胰岛素和C肽，酶法测血脂四项(TC、TG、LDL、HI)L)，血清SOD活性、MDA含量，循环内皮细计数(CEC)；各组剩余大鼠心脏取血4ml，柠檬酸钠抗凝，37℃条件下测定血液流变学各项指标：全血粘度，血浆粘度，全血还原粘度，红细胞沉降率，红细胞压积，纤维蛋白原。文氏管法测红细胞压积压)、willtrobe管法测血沉，硫酸铵比浊法(双缩脲法标定)i煲!l纤维蛋白原。全血粘度采用切变率分别为高切150s1、中切60s～、低切10s一。处死大鼠，迅速剖腹，结扎胃贲门和幽门，取出全胃，收集胃内残留物。722分光光度计以560nm波长下读取光密度值，计算大鼠胃排空率。取胃窦组织全层三块，分别用中性甲醛、4％多聚甲醛、戊二醛固定液中固定，取连续切片，观察以下内容：①行HE、Mallory、Masson和甲苯胺蓝染色，分别观察胃壁全层、胃血管和肌肉纤维样变、肌间丛神经元细胞病变及肌间丛活体神经元细胞内尼氏体病变；②行TNF．Q、IL-1B、CD34、SP、VIP、5-FIT、nNOS、C-kit、TUNEL、Bcl一2、Fas免疫组化染色，分别观察炎性因子表达、胃微血管、肌间丛胃激素与神经递质、ICC病变、肌细胞凋亡与凋亡基因表达；⑨戊二醛固定标本常规方法制作透射电镜切片，观察胃肌间丛组织超微变化。取胰腺胰尾部组织，行HE和醛品红．亮绿橙G染色，观察胰岛组织病变。：3．结果3．1．临床研究146例DM病人，实际参与方程的有效病例142例，其中经B超确诊有DMAP的89例，无DMAP的53例。经回归方程预测有DMAP的89例，无DMAP的53例，预测率为100％。提示方程经16次迭代后拟合较好。DMSP病变有无(o．无，1．有)与DM病程、年龄、文化程度、日锻练时间、DM眼病并发症、病史(高血压史、DM家族史和高血脂史)、体型系数、心电图异常、收缩压、心率、空腹血糖、尿白蛋白、TG、TC等相关，未被剔除(均有P0．05)而保留在方程中，上述因素中DM病程、年龄、DM眼病并发症、病史f高血压史、DM家族史和高血脂史)、体型系数、心电图异常、收缩压、心率、空腹血糖、尿白蛋白、TG、TC均为DMAP独立危险因素，而日锻练时间和文化程度则可能为DMAP的保护因素。在所纳入的DMAP太危险因素中，空腹血糖可能是所有危险因素中最重要(-2 Log似然比变化值为3092．756为最大值)，其次是收缩压和高血脂史，年龄、高血压史、DM家族史、心电图异常、心率、尿白蛋白和TC、文化程度、日锻第1l页广州中医药大学2006届博士学位论文练时间、DM眼病并发症、体型系数、TG作用再次之j作用最小的是DM病程。由以上指标建立的回归方程确定后，逐一剔除上述变量，而保留其余变量，经统计学检验，所有变量单一剔除前后方程似然比对数的负二次方变化值变化均有显著性差异(P0．01)。性别、体力劳动强度、DM神经病变、DM肾病、舒张压、糖基化血红蛋白、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白未能纳入方程，因此可能不是DMAP独立危险因素，以统计检验均为剔除因素，均有无计性差异(均有P0．05)。3．2．动物实验研究．3．2．1．一般情况实验期间，正常组大鼠饮食与尿量明显增加、体重持续增长、精神状态无异常、自主活动无异常、无异常分泌物、无自内障、毛色光滑亮泽、无死亡。造模组表现为食量增加、多尿、体重增加减缓、出现白内障、精神倦怠、自主活动减少等随病程日益明显，皮毛疏松、失去光泽，部分大鼠死亡。糖胃康组、蚓激酶组大鼠诸症状较模型组大鼠减轻，而止血敏组大鼠诸症状却较模型组大鼠为重。3．2．2．大鼠死亡与体重变化蚓激酶组大鼠死亡数最多，糖胃康组次之，止血敏组再次之，正常组大鼠无一死亡，动物