新的遗传性痉挛性截瘫亚型候选基因突变分析-神经病学专业论文.docx

七年制学位论文摘要摘要背景遗传性痉挛性截瘫(hereditary spastic paraplegia，HSP或 SPG)是一种具有高度临床和遗传异质性的神经系统遗传病，患病率 为2／10万～9．6／10万，临床上以缓慢进展的双下肢肌张力增高和无 力为主要特征，复杂型可合并痴呆、共济失调、锥体外系症状、视网 膜色素变性、视神经萎缩、白内障、耳聋、皮肤病变等。其遗传方式 有常染色体显性遗传(AD)、常染色体隐性遗传(AR)及X连锁隐性 遗传(XR)，其中以常染色体显性遗传最为常见。随着分子遗传学研 究进展，到目前为止，遗传性痉挛性截瘫至少已定位35型，但只有 17型致病基因被克隆。在前期工作中，我们采集到一个来自山东省 和内蒙古地区呈常染色体显性遗传的单纯型HSP家系，HSP患者及家 系成员血样标本共19份，其中患者7例(男性5例，女性2例)。在 对该HSP家系进行了atJastin、spastin、NIPAl、KIF5A、Hsp60和 BSCL2基因突变分析和已知位点的排除定位分析后，发现该家系与已 知位点均不连锁，确定为一型新的遗传性痉挛性截瘫亚型，然后通过 全基因组扫描、连锁分析和单体型分析，最终将该HSP家系定位于染 色体llpll．2-p14．1上微卫星标记DllSl324与DIISl993之间约 18．88cM范围内，最高LOD值为2．36，这是国际上定位的一型新的常 染色体显性遗传HSP疾病基因位点，命名为SPG34。七年制学位论文 摘要目的 克隆该新的遗传性痉挛性截瘫亚型的致病基因。 方法采用“位置候选克隆策略，应用生物信息学方法，在疾病基因 定位区间内筛选10个基因作为候选基因；设计合成扩增候选基因外 显子及包括外显子与内含子交界区的引物，用DNA直接测序法对 PCR产物测序然后进行序列变异分析。结果 应用生物信息学方法筛出10个候选基因，分别为DPH4、TTCl7、DKFZP586H2123、ABTB2、CD44、COMMD9、Protor2、APl5、Cllorf41 和C110rf55基因。应用DNA直接测序，在ABTB2、CD44、COMMD9、 Protor2和C110rf4J基因共发现15个序列变异，分别为：ABTB2基因的192CG、IVS6-75TC、IVSl5+34TC；CD44基因的IVS8．60TC、1440IM2：cI绷脚基因的IVS4+84GA；Protor2基因的30CT、ⅣS2．15TG、IVS6+45TC、IVS7+104TC、627AG、IVS9+167AG；Cllorf4J基因的4432AC、4638GA、IVSl6+13TC，均为已报道 的SNP。DPH4、TTCl7、D刚珊586磁J刀、APl5和Cllorf55基因 未发现任何序列变异。结论 1．排除了DPH4、TTCl7、DKFZP586H2123、ABTB2、CD44、COMMD9、Promr2、APl5、Cllorf4J和Cllorf55基因为此新的HSP 亚型致病基因的可能；Ⅱ七年制学位论文摘要2．发现该家系患者存在15个已报道的单核苷酸多态：ABTB2基 因的192CG、IVS6-75TC、IVSl5+34TC；CD44基因的IVS8．60TC、1440TC；C(孙脚基因的IVS4+84GA；Protor2基因的30CT、ⅣS2-15DG、ⅣS6+45TC、IVS7+104TC、627AG、ⅣS9+167赴G：Cllorf4J基因的4432AC、4638GA、IVSl6+13TC。关键词痉挛性截瘫，生物信息学方法，候选基因，突变分析， DNA直接测序Ⅲ七年制学位论文 ABSl融～(了AB STRACTBackgroundHereditary spastic paraplegia(HSP／SPG)is a group of clinically and genetically heterogeneous neurodegenerative disorders．The prevalence of HSP is about 2／1 00，000 to 9．6／1 00，000．It primarily shows slowly progressive spasticity and weakness of the lower extremities．Thecomplex type is also accompanied with dementia，ataxia，extrapyramidal symptoms，pigmentary degeneration of retina，optic atrophy,skin lesions，and et a1．Most of the patients are of an a