铜绿假单胞菌oxa型超广谱β-内酰胺酶耐药基因研究-临床检验诊断学专业论文.docx

硕士学位论文中文摘要摘要目的OXA型超广谱p．内酰胺酶(ESBLs)是由OXA．10，OXA一2和OXA．1三个基因来源的，共分为五组，以第一、二组为主，其主要存在于铜绿假单胞菌中。为了解湘雅医院铜绿假单胞菌中OXA型ESBLs的检出率及其基因的分布情况，开展本次研究。方法收集中南大学湘雅医院2006年9月至2007年1月的非重复铜绿假单胞菌97株，保存于脱脂牛奶管中，放置于．20。C冰箱。所有菌株采用法国梅里埃公司的全自动微生物鉴定系统VITEK．2的GN卡鉴定和ASTGN．13卡进行药敏分析。对97株非重复铜绿假单胞菌采用聚合酶链反应(PCR)进行OXA型ESBLs第一、二组基因筛查，然后用特异性引物对筛查阳性的菌株进行OXA基因扩增，将PCR扩增的DNA产物纯化后进行测序分析，并用BLAST将测序结果与基因库己知序列进行对比分析，确定其基因型。结果经PCR法筛查共检出3株OXA型ESBLs阳性的铜绿假单胞菌，OXA型ESBLs检出率为3．1％(3／97)，1株(PAl3)来自尿标本，1株(PAl5)来自痰标本，1株(PAl7)来自引流液标本。这3株PCR扩增阳性的铜绿假单胞菌全部携带OXA型ESBLs第一组基因，OXA型ESBLs第二组未检测到阳性菌株。然后用OXA．10及其衍生物的特异性引物进一步扩增及测序，结果显示，PAl5和PAl7的基因序列完全一致，另1株PAl3为另一不同的基因序列，经GenBank网上同源性比较，均未发现完全相同的核苷酸和氨基酸序列，提示这两种基因序列为新的OXA型ESBLs基因型，命名为blaOXA．128和硕士学位论文中文摘要blaOXA．129，在GenBank上成功注册，基因登录号为：EU573214和EU573215。结论(1)本研究在国际上首次发现两种新型的OXA型ESBLs分别为blaOXA．128和blaOXA．129。(2)在湖南地区首次从铜绿假单胞菌中检出OXA型ESBLs，湘雅医院OXA型ESBLs的检出率较低。关键词：铜绿假单胞菌，超广谱p．内酰胺酶，OXA，聚合酶链反应，基因ABSTRACTObjectiveTheOXA—typeextended-spectrumB—lactamases(ESBLs)areoriginated fromOXA-10，OXA一2andOXA-1．Theyaredividedintofivegroups，GroupI andGroupIIarethemajorgroups．MostofthemareproducedbyPseudomonasaerugenosa．WehavestudiedtheresearchinordertoacquiretheprevalenceandgenotypedistributionofOXA．typeESBLsinPseudomonasaerugenosastrainswhichwereisolatedfromXiangyaHospitalofCentralSouthUniversity．Methods97non·repetitiveclinicalisolatesofPseudomonasaerugenosastrainswerecollectedfromXiangyaHospitalofCentral SouthUniversityfromSeptember2006toJanuary2007，theywereprese—rvedin一20。Crefrigeratorbydefattingmilk．AllofclinicalisolateswereidentificatedandantibacterialsusceptibilitytestedbyBiomerieusautomatedmicrobiological—assaysystemVITEK-2，usingGNidentificationcardsandASTGN一13cards，respectively．Thegenotypesof97PseudomonasaerugenosastrainswerescreenedaboutOXAgroupIandgroupIIbyPCR，thenthegeneofOXAenzymeinpositivestrainswasamplifiedbyspecificprimersandthePCRproductswerepurificatedandsequencedbyautomaticsequencer．Thesequencesacquired werecomparedwiththeknownsequenceinGenBankdatebaseinordertodeterminethegenesubtypebyBLAST