一株嗜盐杆菌的溶藻特性及其溶藻活性物质的分离纯化-渔业专业论文.docx

一株嗜盐杆菌的溶藻特性及其溶藻活性物质的分离纯化摘要赤潮是全球性的海洋生态灾害问题之一，而其防治研究一直广受关注。海洋 溶藻细菌对赤潮藻类有高效的抑制作用，对环境负面影响较小，已成为赤潮防治 研究的热点之一，尤其是溶藻活性物质的发现，为赤潮治理提供了新的方法和思 路，也是目前研究的难点和要突破的重点。对中肋骨条藻（Skeletonema costatum）具有间接溶藻作用的嗜盐杆菌溶藻菌 株（Halobacillus sp. HSQAY1，GenBank 登录号为 JX308828）由本实验室从深圳 大鹏湾赤潮爆发海域分离并保藏。本文研究了该嗜盐杆菌的生长特征，胞外溶藻 物质的理化特性，并对溶藻物质进行了初步的分离纯化。主要结果如下：（1）采用平板菌落法测定了溶藻细菌 HSQAY1 的生长曲线，结果显示 0-8 h 为迟缓期，8-40 h 为对数期，40-72 h 进入稳定期，72 h 后进入衰亡期；迟缓期期 间细菌无菌滤液的溶藻作用不显著，而进入对数期后其溶藻作用显著增强，此后 溶藻率基本稳定在 80.4%~93.4%之间。（2）细菌分别用 pH 为 5.5，6.5，7.5，8.5 和 9.5 的培养基培养 48 h 后，其无 菌滤液的溶藻率分别为 20.62%，46.10%，61.14%，62.99%，74.41%，表明弱酸性 条件不利于细菌生长或合成分泌溶藻物质，而碱性环境更有利于细菌的生长或溶 藻物质的合成分泌；用盐度分别为 20，25，30，35，40 培养基培养细菌 48h，其 无菌滤液的溶藻率分别为 53.03%，88.13%，87.94%，41.91%和 17.25%，表明盐 度为 25~30 时最有利于细菌生长或合成分泌溶藻物质，而盐度过高（盐度为 40） 则会抑制其生长或溶藻物质的合成。（3）菌株 HSQAY1 产生的溶藻活性物质在强酸性条件下（pH=3）丧失活性， 而 pH 5~11 时其溶藻率在 83.4%~98.4%之间；温度在 30 ~110 ℃时，其溶藻率在 71.7%~94.5%之间，表现出一定的酸碱稳定性和热稳定性；此外，该溶藻物质不受 反复冻融（-20 ℃）的影响。说明溶藻活性物质不耐强酸，但有较好的耐碱性、热 稳定性和不受反复冻融影响，有较强的环境稳定性。（4）无菌滤液经乙醇沉淀分离获得的沉淀相具有溶藻活性，溶藻率高达到 65.6%，而浸提相无溶藻活性；硫酸铵饱和度为 60%~80%时可析出具有显著溶藻 活性的粗蛋白沉淀，超滤法获得溶藻活性组分的分子量大于 10 kDa，表明该溶藻I活性物质可能是一种分子量大于 10 kDa 的蛋白类物质。（5）硫酸铵沉淀的粗蛋白 SDS电泳结果显示在 15~40 kDa 间有 3 条明 显的特异蛋白条带，高效液相色谱（SEC 柱）分析结果显示出 3 个峰，其中可能 包含有溶藻活性物质组分。关键词：嗜盐杆菌菌株 HSQAY1，中肋骨条藻，溶藻物质，环境稳定性IIAn algicidal bacterium involved in its algicidal characteristics and the characterization of the algicidal substanceAbstractRed Tide is one of the serious ecological marine disasters. Its prevention and control research has been wide concern. Now more attemions have focused on the issue that algae-lysing bacteria act as a possible factor to mitigate the adverse effects ofHABs．Especially the found of algicidal substances provides new methods and ideas forthe red tide control. As a result, it has more application value and is also the focus of the current study and the difficulty to break. 4 marine algicidal bacterialstrains against Skeletonema costatumand isolated from a HABs area of Mirs Bay, but only one marine bacterial strain named HSQAY1 could pr