新型医用可吸收镁合金jdbm的生物毒性、髓内降解及细菌学相关分析-外科学(骨外科学)专业论文.docx

博士学位课题简介项目来源：一：上海市科委重大基础项目项目编号：No. 11DJ1400304课题名称：镁合金生物相容性及骨修复机理的研究起止年月：2012年01月--2014年1 2月项目主持人：蒋垚教授完成情况：在研本人工作：课题参与人二：上海市科委医学引导项目课题编号：124119a7201课题名称：一种新的关节假体感染生物膜病原菌组合式检测方法的建立和临床应用研究起止年月：2012年10月1日—2015年9月30项目主持人：沈颢完成情况：在研本人工作：参与新型医用可吸收镁合金JDBM的生物毒性、髓内降解及细菌学相关研究中文摘要第一部分新型医用可吸收镁合金JDBM的生物毒性目的：交大镁合金系列（JiaoDabio-magnesiumseries, JDBM）是上海交通大学轻合金精密成型国家工程研究中心设计开发的生物相容性好、强度和塑韧性相匹配、腐蚀行为近乎均匀的新型高性能生物医用Mg-Nd-Zn-Zr (平衡-3-0.2-0.4 wt. %)基合金系列，分为2 类，JDBM1具有高强度和中等塑性，应用于骨科；JDBM2具有高塑性和中等强度，应用于血管支架。该合金体系添加了少量细胞毒性轻微的轻稀土元素Nd作为低合金化元素，Nd的加入可以保证镁合金具有良好的时效析出强化和固溶强化效果，并可大幅度提高合金基体的电极电位，减小基体与第二相的电偶腐蚀电位差，从而提高镁合金的耐均匀腐蚀性能。Zn是人体生理需要的微量元素，微量加入可提高合金强度及塑性加工能力；微量Zr作为晶粒细化剂可提高合金的强韧性和耐蚀性，其在镁合金中的生物相容性已经证实。JDBM 的强度、柔韧性、耐蚀性能和生物相容性全面超越已经在欧洲进入临床实验的WE43 镁合金。相比于商业性的WE43 和AZ31 镁合金，JDBM具有更好的生物相容性。JDBM在体内90 天时基本完好，在180天时降解少于40%。本实验的目的，即通过研究含轻稀土Nd元素的JDBM 镁合金及单纯的Nd对体外培养的小鼠胚胎成骨细胞株MC3T3-E1 的毒性，分析JDBM镁合金中稀土元素Nd的体外成骨细胞毒性，体内实验部分通过研究Nd对昆明小鼠骨及周围组织的生理病理影响，以及其在小鼠各器官组织中的分布，来研究Nd的生物安全性及其动物体内分布情况。方法：按标准方法用aMEM 培养基制作Nd的浸提液，并稀释为1/2、1/4、1/8 几个不同的浓度梯度，同时制作Ti合金、WE43 镁合金、JDBM 镁合金及CaP涂层JDBM 镁合金的浸提液，以正常培养组做空白对照，以Ti合金浸提液组做阴性对照，以0.64%苯酚组做阳性对照，用含10% 澳洲胎牛血清的aMEM培养基对MC3T3-E1成骨细胞进行培养，观察其不同时间的形态变化及增殖情况，并以CCK8 法检测其不同时间的细胞增殖活性，以AnnexinVPI双染色流式细胞术检测不同时间的细胞凋亡情况。将梯度量的Nd微粒加入正常培养的成骨细胞培养液中，最低量接近JDBM植入物释放的Nd量，观察微粒入胞情况，并制作细胞爬片，用电子目镜接普通显微镜直接动态观察细胞吞噬Nd微粒的情况，然后行HE 染色观察细胞形态变化。体内实验部分，将不同量的Nd微粒置于小鼠股骨旁组织，检测1、3、5 天小鼠的血液电解质、肝肾功能变化、Nd在小鼠体内的分布及局部病理切片观察Nd微粒引起的病理变化。结果：用CCK8法检测细胞增殖活性，Nd浸提液原液组细胞毒性较大，与苯酚阳性对照组实验结果一致，其与正常对照组、Ti合金浸提液组、JDBM浸提液组、WE43 浸提液组、Nd浸提液1/4、1/8 浓度组相比P 0.00001，而后几者之间无明显统计学差异。Nd浸提液原液及苯酚组与Nd 浸提液稀释至1/2 组之间P 0.01，有明显统计学差异。从流式细胞术检测结果得知，随Nd浸提液浓度及作用时间的增加，成骨细胞凋亡明显增多。微粒入胞实验动态及静态观察发现，成骨细胞通过主动胞吞作用吞噬周围环境中的Nd微粒，微粒较少时细胞生长无明显影响，微粒量多时则可导致成骨细胞膜破裂，直至细胞崩解死亡。通过计算比较，JDBM 及WE43中Nd2.5%左右的含量可能会导致周围细胞的损伤。将不同量的Nd微粒置于小鼠股骨旁组织，小鼠的血液电解质及肝肾功能较正常组无明显变化。小鼠体内各组织器官的Nd元素分布因无合适的检测合作单位而待测，病理组织切片显示大量的Nd微粒对周围组织细胞有一定的损伤。结论：Nd浸提液的成骨细胞毒性及对成骨细胞凋亡的影响随浓度的减小而减小，JDBM 中微量Nd对成骨细胞无明显毒性；成骨细胞通过主动胞吞作用摄取周围环境中的Nd微粒，当微粒数量达到一定程度时，成骨细胞崩解，JDBM 中微量Nd颗粒对成骨细胞的增殖及形态无明显不良影响。相对于Nd微粒的细胞损伤，JDBM和WE43 中的Nd含量可能过高。Nd微粒