pcr技术及其发展与应用.ppt

图1 第1、2、3组引物多重PCR电泳图 1：正常对照；2：DL2000 marker；3~10：检出的缺失型患者 杜氏/贝克型肌营养不良症 一种常见的致死性神经-肌肉系统的X连锁隐性遗传病，其基因突变中缺失最常见，约占55%~65%，缺失分布的位点较多，随地域及民族的差异而有不同特点 * 4、突变PCR （1）随机突变： 应用：构建突变体文库，继而可从中筛选出具有特殊性质的突变个体 策略：易错PCR（error-prone PCR）。 利用Taq DNA聚合酶等耐热DNA聚合酶不具有3′→5′校对功能的特性，在PCR扩增反应中可能掺入错误的核苷酸，从而产生随机错误的扩增产物。 加入次黄嘌呤核苷酸并限制某一种核苷酸的用量，从而促进DNA聚合酶选择其它3种核苷酸或次黄嘌呤核苷酸，导致扩增产物发生突变。 * （2）定点突变 （1）5‘端引入突变：通过修饰上游引物的5’ 端，即可引入标记的碱基、限制性酶切位点、启动子序列等。 （2）序列中的单位点突变：采用重叠延伸PCR(Overlap Extension PCR，OE PCR) * （A）为5‘端引入突变 （B）为单碱基突变 * 例子：S.pn的ply146aa缺失的突变序列构建 S.Pn的ply为一细胞毒性分子，其146位aa缺失后毒性大大减弱。构建突变体作为