2酶的发酵生产.pptVIP

固定化细胞生长和产酶曲线 （2） 固定化细胞产酶动力学方程 根据固定化细胞和游离细胞产酶模式而定 （3 ）固定化细胞连续发酵产酶动力学 稀释速率D只影响游离细胞浓度，对载体上细胞无影响 显著优点之一，可在高稀释速率条件下进行连续发酵 ε：比产酶速率 （3 ）固定化细胞连续发酵产酶动力学 发酵容器内细胞达动态平衡 3、固定化细胞发酵 优点：（1）固定化细胞的密度大，反应器生产强度大；（2）发酵稳定性好，可以连续使用较长时间，易于连续化，自动化生产；(3) 可在高稀释率的条件下连续发酵（D＞μm）,提高设备利用率；（4）发酵液含菌体较少，利于产品分离。 缺点：（1）不能强烈搅拌；（2）技术要求高，传质传热效果差（氧气供给，温度控制。培养基成分的控制）；理论研究阶段；（3）只适用于胞外酶的生产。 4、固定化原生质体发酵（80年代中期） 优点：（1）解除细胞壁扩散障碍，可使胞内物质分泌到胞外，变革了胞内酶的生产工艺和技术路线；（2）可使细胞胞间质中的物质，如碱性磷酸酶等变为胞外产物；（3）稳定性良好，可反复或连续使用。 。缺点：（1）原生质体的制备比较复杂；（2）发酵培养基中需维持较高的渗透压；（3）要防止细胞壁再生 二、发酵工艺条件及控制 1．酶的发酵生产要求 ①性能优良菌种（产率，稳定性，发酵周期，营养要求，副产物，安全性） ②满足菌种生长需求； ③满足菌种产酶需求。 2．酶发酵生产的工艺流程 保藏菌种?菌种活化?菌种扩大培养?发酵?分离纯化?酶 三、培养基 培养基设计考虑： ①菌种特性 ②不同培养阶段 ③产物 ④原料来源难易 产酶促进剂 凡能显著增加酶产量的某种少量物质, 主要为酶的诱导物或表面活性剂。 表面活性剂：①提高膜的通透性 ②对酶的失活有保护作用 ③消泡以提高氧传递系数 吐温80（0.1%）对多种酶产量提高的倍数 酶 来源 酶产量提高倍数 纤维素酶 多种霉菌 20 蔗糖酶 多种霉菌 16 β-1,3葡聚糖酶 多种霉菌 10 β-葡萄糖苷酶 多种霉菌 8 木聚糖酶 多种霉菌 4 淀粉酶 多种霉菌 4 核苷酶 多种霉菌 5 酯酶 多种霉菌 6 右旋糖苷酶 绳状青霉 2 茁霉多糖酶 产气气杆菌 1.5 四、pH 值 1、与细胞的生物繁殖以及发酵产酶有密切关系 ①影响微生物体内各种酶的活性，导致微生物代谢途径发生改变 ②影响微生物形态和细胞膜的透性，从而影响微生物对培养基中的营养成分的吸收和代谢产物的分泌 ③影响培养基中某些营养物质的分解或中间代谢产物的解离，从而影响微生物对这些物质的利用 2 、最适pH 2.1 生长最适pH（一般情况下）: 细菌、放线菌 6.5～8.0 霉菌、酵母菌 4.0～6.0 植物细胞 5.0～6.0 2.2 产酶最适pH： 酸性蛋白酶4.0～6.0，中性蛋白酶6.0～7.0，碱性蛋白酶8.5～9.0；一般接近该酶反应的最适pH。注意：某些酶在该酶反应的最适pH条件下，细胞受到影响，故产酶最适pH与反应的最适pH有明显差别，如枯草杆菌碱性磷酸酶反应的最适pH为9.5而产酶最适pH为7.4。 3 、改变各种酶之间的产量比例 例：黑曲霉：?-淀粉酶、糖化酶 pH偏中性， ?-淀粉酶增加，糖化酶减少 pH偏酸性， ?-淀粉酶减少，糖化酶增加； 4 、发酵过程中培养基pH的变化 菌种的特性、培养基组分、发酵条件等决定，引起pH变化的主要原因：微生物对培养营养成份的利用和代谢产物的积累。 生理酸性物质的生成或释放，或生理碱性物质的消耗导致发酵液pH下降。 生理碱性物质的生成或释放，或生理酸性物质的消耗导致发酵液pH上升。 5、pH控制 ①初级调节控制（起始培养基）调整C/N，调整生理酸性物质与生理碱性物质之比。 ②补料调节：流加酸/碱，碳、氮源 ③溶解氧调节：控制代谢中间产物的氧化程度 ④维持一定的pH值，添加缓冲液 五、温度 最适生长温度：枯草杆菌 34～37℃，黑曲霉 28～32℃，植物细胞 25℃ 最适产酶温度低于最适生长温度，在相对较低温度下，提高酶的稳定性，延长细胞产酶时间 有些酶的发酵生产，要在不同阶段控制不同温度条件 生物热，控制温度 六、溶解氧 调节溶氧速率的方法： ① 调节通气量 ② 调节氧的分压 ③调节气液接触时间：增加液位高度，增设档板 ④调节气液接触面积：提高搅拌速率，空气分布管及其及直径 ⑤培养液的特性：粘度、表面张力菌体浓度，离子浓度 七、泡沫 1、产生原因 通气