实验室操作技术.ppt

仕必得 实验室常规工作 无菌操做 室内环境卫生、仪器洗涤、消毒 常用试验器材安全使用 高压锅、离心机、捣碎机、恒温箱等 高压锅使用注意事项 1、用前调试好 2、加盖 3、掌握好阀门 4、放气 5、加热 6、冷却 可高压灭菌的器材 青霉素瓶及瓶盖 　 培养皿　 移液器咀 　 注射器　 盐水瓶及瓶盖　 药敏片　 营养琼脂　 长时间放置溶液 不可高压灭菌的器材 有机玻璃的器材 带精确刻度 塑料的器材 金属等器材 实验室常做试验 血凝和血凝抑制试验 药敏试验 琼脂扩散试验 平板凝集试验 组织灭活苗制做 血凝与血凝抑制试验 试验仪器 96孔V型板、塑料采血管、微量移液器、一次性注射器、精密PH试纸等 试剂 PBS、红细胞悬液、被检血清、4单位抗原、8单位抗原等 操作步骤及结果判定 临床应用 磷酸盐缓冲液配制及注意事项 20倍磷酸盐缓冲液配制： 红细胞悬液配制与注意事项 红细胞悬液配制： A、采血 B、洗涤 C、配比  其他试剂配制 标准抗原、标准阳性血清 4单位抗原、8单位抗原 被检血清 血凝试验（HA）操作步骤 A、微量血凝板每孔中滴加PBS液50μL，共滴四排. B、1:5稀释抗原滴加于第一列孔均50μL，然后由左至右顺序倍比稀释至第11列孔，再从第11列孔各吸取50μL弃之。最后一列不加抗原作对照。 C、于每孔中加入红细胞悬液50μL. D、置微型振荡器上振荡1min，或手持血凝板绕圆圈混匀。放室温下(18~20℃)30~40min。  判断结果 根据血凝试验算出： 最高凝集价、4单位抗原、8单位抗原 实际应用： 血凝抑制试验（HI）操作步骤 先取PBS液50μL，加入微量血凝板的第1孔，再取浓度为4单位抗原依次加入3~12孔，每孔50μL，第2孔加浓度为8个血凝单位的抗原50μL。 吸被检血清50μL于第1孔中，挤压混匀后吸50μL于第2孔，倍比稀释至第12孔，最后弃去50μL。 置室温作用20min。 滴加50μL红细胞悬液于各孔中，振荡混合后，室温下静置30~40min 。 血凝抑制试验（HI）操作步骤 先取PBS液50μL，加入微量血凝板的第1-12孔 吸被检血清50μL于第1孔中，挤压混匀倍比稀释至第10孔，最后弃去50μL。 吸4单位抗原于1-11孔，每孔均加]50μL。 置室温作用20min。 吸50μL红细胞悬液于各孔中，振荡混合后，室温下静置30~40min 。 判断结果： 凝集试验原理示意图 血凝抑制试验临床应用 若有10%以上的鸡出现11(log2)以上的高血凝抑制滴度，说明鸡群已受新城强毒感染过。 若监测鸡群免疫水平时： A、则血凝抑制滴度在4(log2)的鸡群保护率为50%左右； B、在4(log2)以上，鸡群的抗体水平高；在以4(log2)下， 鸡群的抗体水平低。 C、鸡群血凝抑制滴度以抽检样品的几何平均值都在在4(log2)以上，表示该鸡群为免疫鸡群。 药敏试验操作流程 材料准备 药敏片制备、培养基的制备、病料准备等 操作方法 结果判断 药敏片制作 培养基制备 A、称营养琼脂 称取营养琼脂6克，加入容器内，再加入200mL蒸馏水。 B、高压灭菌 灭菌后，冷却至50－60℃， C、倒平板 在无菌操作台内，迅速倒入培养皿内，每15mL左右（直径9cm），轻摇平皿，使培养基分布均匀。待其冷却凝固后，即可使用，或放入4℃冰箱备用。 试验操作与异常结果分析 药敏试验操作步骤 异常结果分析： 药敏片、培养箱的温度、湿度、采取的病料等 临床应用 琼脂扩散试验 试验仪器 试剂 标准阳性血清、标准抗原、待检血清、甲液、乙液等 琼脂板的制备 结果判定 琼脂板制备 制板 A、取甲液24ml，乙液76ml放于三角瓶中混合，加0.8g或1g琼脂糖，8g氯化钠 B、加热熔化 C、取直径9cm平皿，每个倒入20ml，待凝固后放于冷藏冰箱中保存备用 琼脂板制备 制板 打“梅花型”孔 “梅花型”直径是3cm， 孔径4mm（如图） 琼脂板制备 制板 打“梅花型”孔 封底 加样 琼扩试验判断结果 判断结果 自家苗制作流程 采取病料 组织捣碎 纱布过滤 组织灭活 平板凝集试验 试验材料 白瓷反应板、凝集反应抗原、阳性血清、阴性血清等。 操作方法 结果判定 平板凝集试验判定标准 在1～2分钟呈现紫色絮状的大凝集块，