dats通过活化src激酶诱导hl审审60细胞nadph氧化酶活化的机制word格式论文.docxVIP

目录主要英文缩略语索引 错误!未定义书签。 中文摘要2英文摘要4 前 言 错误!未定义书签。 实验材料9 实验方法 错误!未定义书签。实验结果 错误!未定义书签。讨 论 错误!未定义书签。结 论26参考文献27综 述 错误!未定义书签。硕士期间撰写的论文 32致 谢45主要英文缩略语索引英文缩写英文全名中译名DATSdiallyl trisulfide二烯丙基三硫HL-60human leukemia人早幼粒白血病细胞NADPHreducedniucotinamideadenine dinucleotide phosphate还原型烟酰胺腺嘌呤二核 苷酸ROSreactive oxygen species活性氧SDSSDS-polyacrylamide gel electrophoresisSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳rpmrevolutions per minute每分钟转数NBTnitroblue tetrazolium硝基四氮唑蓝PMSFphenylmethylsulfonyl fluoride苯甲基磺酰氟SDSsodium dodecyl sulfate十二烷基硫酸钠Srcv-src sarcoma (Schmidt-Ruppin A-2) viral oncogene homolog (avian)Src 酪氨酸激酶P130 CasCrk associated substrateCrk 相关底物CrkCT-10-regulated kinaseCT10 调节激酶PP24-Amino-5-(4-chlorophenyl)-7-(t-butyl) pyrazolo[3,4-d]pyrimidine4 -氨基- 5 -（4 -氯苯基）-7 -（叔丁基）吡唑并[3,4 - d]嘧啶DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚砜cDNAcomplementDNA互补脱氧核糖核苷酸DEPCdiethyl pyrocarbonate焦碳酸二乙酯bpbase pair碱基对EBethidium bromide溴化乙啶KDakilodalton千道尔顿PBSphosophate buffered saline磷酸盐缓冲液ODoptical density光密度ddH2Odouble distillated双蒸水RT- PCRreverse transctiption polymerase chain reaction逆转录聚合酶链反应Western blotwestern blotting analysis蛋白质免疫印迹检测技术DATS 通过活化 Src 激酶诱导 HL-60 细胞 NADPH 氧化酶活化的机制硕 士 研 究 生： 王威指导教师： 唐圣松 教授中文摘要目的：探讨二烯丙基三硫(diallyl trisulfide，DATS)诱导人早幼粒白血病 HL-60 细胞NADPH 氧化酶活化的机制。方法：用浓度为 50、100、150μM 的 DATS 处理 HL-60 细胞 15min，蛋白免疫印 迹法检测 Src 激酶的活化情况。用 150μM DATS 处理 HL-60 细胞 0min、5min、15min、 30min、60min、180min，蛋白印迹法分别检测 Src、p130Cas、CrkⅡ和 NADPH 氧 化酶亚基 p47phox 的磷酸化水平；用 Src 特异性抑制剂 PP2 预处理后，观察 150μM DATS 处理细胞 15min 后，HL-60 细胞 Src、p130Cas、CrkⅡ、NADPH 氧化酶亚基 p47phox 磷酸化水平的变化。RT-PCR 检测 150μM DATS 处理 HL-60 细胞 0min、5min、 15min、30min、60min、180min 后 NADPH 氧化酶亚基 p47phox、Rac2 的 mRNA 表 达水平；同时检测 PP2 预处理后，150μM DATS 处理细胞 15min ，p47phox、Rac2 mRNA 表达水平的变化。NBT 比色还原实验检测 PP2 预处理后，150μM DATS 诱 导 HL-60 细胞 NADPH 氧化酶活性的变化。结果：不同浓度 DATS 处理 HL-60 细胞 15min 后，蛋白免疫印迹法显示 Src 激酶 的活化与 DATS 浓度正相关，即 150μM DATS 诱导 Src 的活化水平最高。150μM DATS 处理 HL-60 细胞不同时间，均可诱导 Src、p130Cas、CrkⅡ、p47phox 的磷酸化，其中 Src 在处理 15min、p130Cas 和 p47phox 在处理 30min 时活化水平最 高，其后有所降低；CrkⅡ的磷酸化水平则随处理时间的延长而升高；