dhlrada16自组装活性多肽纳米纤维支架凝胶对兔髓核细胞的作用word格式论文.docxVIP

独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文 中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名： 日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本 人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索， 可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□ ，在年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打“√” ）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日前言腰椎间盘突出症是骨科的常见病和多发病，是腰腿痛最常见的原因，严重影响患 者的工作、生活。现在认为椎间盘退变是引起腰椎间盘突出症的病理基础，腰椎间盘 是身体负荷最重的部分，正常的椎间盘椎间盘组织富有韧性和弹性，具有强大的抗压 能力，它以大量基质为主要组成结构，少量细胞散在分布于基质中，蛋白多糖和胶原 是构成椎间盘基质的主要蛋白质，决定基质结构和功能的完整性，因而它们的损耗是 椎间盘退变的重要因素。然而，人在 20 岁以后，椎间盘即开始退变，髓核含水量逐 渐减少，椎间盘的弹性和抗负荷能力也随之下降。退变的髓核组织易从纤维环的薄弱 处突出，压迫神经根或马尾神经，引起腰痛和下肢的放射性疼痛，以及神经功能损害 的症状和体征[1]。传统的椎间盘突出症的治疗方法主要包括非手术治疗和手术治疗两大类。其中非 手术治疗主要包括：1.一般治疗，卧床休息，腰背肌功能锻炼，支具固定等；2.药物 治疗，止痛，舒筋活血治疗；3.牵引按摩推拿治疗；4.硬膜外腔和骶管注射疗法。手 术治疗主要为：1.椎板切除髓核摘除术；2.显微椎间盘髓核摘除术；3.经皮穿刺胶原酶 溶核术、切吸术、激光烧熔术。目前临床应用的新技术，如人工椎间盘置换、人工髓 核置换等也难以完全模拟和替代正常的椎间盘。这些方法虽然可以减轻临床症状，但 仍存在并发症和远期疗效不佳的问题，更不宜应用于椎间盘退变的早期治疗。相比之 下，采用组织工程学技术直接修复髓核，使椎间盘再生，既促进椎间盘细胞分泌细胞 外基质，抑制分解代谢过程相关酶，防止细胞外基质降解、退变，进而阻止或预防退 变过程的发生是治疗椎间盘退变的理想途径。组织工程学（tissue engineering）是一门新兴交叉科学，是应用细胞生物学、生物 材料和工程学的原理，研究开发用于修复或改善人体病损组织或器官的结构、功能的 生物活性替代物的一门科学。它的科学意义不仅在于为解除病人痛苦提供了一种新的 治疗方法，更重要的是提出了复制“组织”、“器官”的新思想。以往已有组织工程技术 运用于神经系统有关的疾病的治疗。然而以往的采用组织工程学中细胞移植治疗疾病的过程中，治疗效果并不十分理想，其主要原因是移植术后组织工程材料于机体的生物相容性差，导致的细胞存活率 和一体化程度较低等[2、3]，其原因主要为：机械强度高、生物降解性差、降解物具有 毒性及无生物活性等，这些缺点限制了它们在医学组织工程中的应用[4-6]。本课题组自行设计并且合成了含有连接蛋白核心序列 linkN（DHLSDNYTLDH DRAIH）的多肽两亲性分子 DHL-PA，其具有以下优点：1.本质上是氨基酸组成的多 肽，无免疫原性；2.可形成与天然细胞外基质纳米尺度相近的纤维结构，易于营养物 质、活性分子、气体的弥散，利于细胞生长；3. 自组装形成的多肽纳米纤维，具有一 定流动性，可用注射器抽吸，便于微创手术操作；4.制备简单，易于大量获取，普遍 应用；5.肽的序列可根据需要加以修改，便于调节其活性；而且，link N 同时具有保 护 ECM、刺激合成新的 ECM 和进行结构稳定的功能，是目前发现的髓核 ECM 中唯 一具有此功能的活性多肽。使其与纯肽 RADA-16-PA 混合并用细胞培养基 DMEM-F12 触发形成 DHL/RADA-16 三维纳米纤维支架，将兔髓核细胞和活性多肽纳米纤维材料 复合培养，观察活性多肽纳米纤维材料对髓核细胞的生物学行为的影响，为该活性多 肽纳米纤维材料在髓核组织工程中的应用提供实验依据。1 材料和仪器1.1多肽两亲性分子的序列结构：DHL-PA 序列为 AcN-RADARADARADARADAGGDHLSDNYTLDHDRAIH-CON H2，RADA-16-PA 序列为 AcN-RADARADARADARADA-CONH2，其中 DHL-PA 为本课题组自行设计。DHL-PA 和 RA