dishevelled2在前列腺癌转移进展机制中作用的研究word格式论文.docxVIP

摘 要研究背景: 前列腺癌是欧美国家最常见的男性恶性肿瘤之一，是男性癌症死因的第 二位。我国前列腺癌发病率虽然远低于西方国家，但近来随着人口老龄化及生活条 件的改善，发病率呈逐年上升趋势。目前，前列腺癌早期均采用雄激素剥夺治疗且 疗效满意。因为前列腺癌的生长、进展的最初阶段均有雄激素依赖性的特性，但经 过一段时间的雄激素剥夺治疗后，几乎所有前列腺癌将转变为雄激素非依赖性前列 腺癌（androgen-independent prostate cancer, AIPC）。AIPC 的形成机制目前尚未阐明， 缺乏有效治疗手段，一般均是应用放疗和化疗，患者的预后较差。Dishevelled （Dvl）蛋白是 Wnt 信号通路中关键的具有高度保守区域的信号蛋 白分子，目前研究表明，其具有三种同型异构体在人类的胚胎以及成人的多种组织 中，如脑，心脏，肺，肾脏，骨骼肌等中均有表达。并且多个研究中心研究报道， Dvl 在多种肿瘤，如乳腺癌，结肠癌，前列腺癌，肺癌等中高表达。该家族成员具 有三个高度保守区域: N 末端 的 DIX 域、PDZ 域、DEP 域, 其中 PDZ 域是β-catenin 稳定性所必需的。Fz 激活 DVL 使其 DIX 域与 GSK-3β结合, 抑制 GSK-3 β的活性。Dvl2 是该家族中的重要成员之一，定位于 17 号染色体短臂 13 区，在三 种异构体中其表达量最高，占到 80%左右。然而其精确的功能以及在前列腺癌进展 机制中的研究未见报道。研究目的与方法：明确 DVL2 在前列腺癌组织和不同细胞系中的表达差异，并探讨 其在前列腺癌进展过程中的意义以及作用机制。采用半定量和定量 RT-PCR 检测前列腺癌不同细胞系（LNCaP,LNCaP-AI,PC-3, DU-145）以及前列腺癌组织中的表达差异，利用免疫组化的方法检测 109 例前列腺 癌患者的标本中 DVL2 的表达差异，并且体外模拟临床前列腺癌的治疗过程，并对 前列腺癌细胞（LNCaP ,PC-3）给予双氢睾酮和比卡鲁胺刺激后，观察两组细胞内 Dvl2 表达水平的变化; 并利用小干扰 RNA 技术下调 Dvl2 的表达，观察前列腺癌细 胞在增值、迁移以及侵袭作用的改变，同时探讨其功能改变在前列腺癌发生及激素 非依赖进展机制的研究。研究结果：1、利用半定量 PCR 的方法检测 27 例前列腺癌患者的 DVL2 基因水平的差异， 发现癌组织较其癌旁组织明显高表达（14 of 27; 51.9%）。2、免疫组织化学技术检测 109 例前列腺癌术后标本（ADPC/AIPC:104/5）, 发现 5 例 AIPC 中均明显强阳性表达，ADPC 中 DVL2 的染色强度与肿瘤的分期及 淋巴结的转移情况有关，Gleason 评分低，DVL2 表达低，Gleason 评分越高，DVL2 的表达越高。通过病理科医生进行了半定量评分后，统计学分析表明，具有统计学意义（P0.05）。实验结果表明，激素依赖与激素非依赖前列腺癌两组对比，说明DVL2 在激素非依赖前列腺癌表达高于激素依赖前列腺癌。3、利用 RT-PCR 检测 LNCaP,LNCaP-AI,PC-3,DU-145 中 DVL2 的表达，其中LNCaP 细胞系的表达明显高于 PC-3,DU-145 细胞系的表达；4、对 LNCaP 和 PC-3 均给予不同浓度双氢睾酮和比卡鲁胺刺激刺激后， LNCaP 随着双氢睾酮浓度的增加 DVL2 的表达具有上升趋势，随比卡鲁胺浓度的降 低 DVL2 基因表达量下降。而对 PC-3 而言，DVL2 的表达水平受激素的调控趋势未 见明显变化。5、通过转染 DVL2 的小干扰 RNA 下调其表达水平后，利用 CCK-8 方法检测 转染 DVL2-RNAi,DVL2-NC,以及空白对照组中 LNCaP 细胞生长情况，发现降低 DVL2 表达水平后细胞的生长明显受到抑制。证明 DVL2 在前列腺癌细胞的恶性增 殖过程中起着重要作用；6、同样对以上三组不同处理的 LNCaP 细胞进行划痕实验，发现下调 DVL2 表达后的一组细胞迁移至空白区的细胞数量较对照组明显减少，证实其迁移能力明 显降低；7、进一步实验利用 Transwell 侵袭实验发现转染 DVL2 小干扰 RNA 后的细胞 穿过基质胶的细胞数量较对照组明显降低，提示 DVL2 在前列腺癌细胞的侵袭能力 有一定的作用。8、为探讨 DVL2 在前列腺癌进展中具有明显迁移作用的机制，同样剂量的小 干扰 RNA 处理下调 DVL2 的表达后，利用 Western Blot 检测蛋白中 Wnt-3a 及 MMPs 表达水平的改变，结果显示，伴随着 DVL2 蛋白水平的降低，Wnt-3a 及 MMP-2,9 的蛋白表达量