dna桥接的肿瘤靶向组装型树状大分子的制备和分析word格式论文.docxVIP

缩略词表 abbreviations英文缩写英文全称中文名1H-NMRProton Nuclear Magnetic Resonance质子核磁共振PAMAMPolyamide-amine聚酰胺-胺FITCfluorescein isothiocyanate异硫氰酸荧光素FAFolate acid叶酸G5Generation 5第五代AceAcetylation乙酰化FRFolate receptor叶酸受体PBSphosphate buffered saline磷酸盐缓冲液FCSFetal calf serum胎牛血清AGEagarose gel electrophoresis琼脂糖凝胶电泳EDTAEthylene Diamine Tetraacetic Acid/view/450307.htm乙二胺四乙酸TBETris Boric acid bufferTris 硼酸缓冲液G-25Sephadex Gel-25葡聚糖凝胶 G-25CON34-寡核苷酸代号 1SON34-寡核苷酸代号 2HelaHenrietta Lacks人体宫颈癌细胞株EDC5-P--水溶性碳二亚胺缩合剂(DNA)5 端磷酸化修饰DNA 桥接的肿瘤靶向组装型树状大分子的制备和研究研究生：范 伟导师：吕子敏 副教授摘要目的：利用互补单链 DNA 杂交技术，设计制备叶酸受体介导靶向肿瘤细胞的荧光示踪 组装型聚酰胺-胺树状大分子 FA-ACE-PAMAM-DNA-PAMAM-ACE-FITC，并通过叶酸 受体表达阳性的人体宫颈癌细胞株（Hela 细胞株）的摄取实验，初步验证其肿瘤细胞 靶向性及游离叶酸对其靶向性的拮抗作用。方法：先将第五代聚酰胺-胺树状大分子（G5 PAMAM dendrimer）部分酰化，分两组： 一组与叶酸在偶联剂的作用下形成连有叶酸的树状大分子（PAMAM-ACE-FA），另一 组与 异硫氰酸荧光素（ FITC ） 酰胺化生成异硫氰酸荧光素的树状大 分 子（PAMAM-ACE-FITC），两组大分子再分别与经水溶性碳二亚胺缩合剂（EDC）活化 的互补单链 DNA 相连，最后利用 DNA 杂交原理，组装具有荧光示踪功能的叶酸受体 介导组装型聚酰胺-胺树状大分子 FA-ACE-PAMAM-DNA-PAMAM-ACE-FITC。用荧光 显微镜观察 Hela 细胞摄取情况，考察 FA-ACE-PAMAM-DNA-PAMAM-ACE-FITC 的叶 酸受体介导的靶向性及游离叶酸对其靶向性的拮抗作用。结果：（1）产物经葡聚糖凝胶层析和纯水透析纯化至 TLC 已检测不到游离 FA 及 FITC 后，UV 扫描验证结果表明，PAMAM-ACE-FA 和 PAMAM-ACE-FITC 制备成功。1H-NMR 检测结果，根据谱图积分结果，平均每个 PAMAM-ACE-FA 约含 4.1 个 FA，每个 PAMAM-ACE-FITC 约含 5.0 个 FITC。（2）琼脂糖凝胶电泳检测结果表明，单链 DNA 成功连接至 PAMAM-ACE-FA 和 PAMAM-ACE-FITC。通过电泳检测和 UV 扫描，证明 PAMAM-ACE-FA 和 PAMAM-ACE-FITC 通过 互 补 单 链 DNA 桥接 组 装 成 为 了 FA-ACE-PAMAM-DNA-PAMAM-ACE-FITC。（4）在 Hela 细胞摄取实验中，经 DNA 桥接形成的 FA-ACE-PAMAM-DNA-PAMAM-ACE-FITC 可以被细胞特异性摄取而产生 荧光。结论：本研究设计并制备了 DNA 连接的肿瘤细胞靶向型组装型树状大分子，并可以透过细胞膜被叶酸受体表达阳性的 Hela 细胞特异性摄取。初步验证了组装型树状大分子可根据临床需要选择功能及靶向大分子库即时即用进行组装的可行性。制备的组装型 树状大分子组装简便，水溶性好，避免了非组装型树状大分子由于空间位阻等原因造 成的合成上的困难。关键词：叶酸；肿瘤靶向；聚酰胺-胺树状大分子；DNA 桥接；组装型AbstractObjective: To design and prepare assembled PAMAM dendrimers FA-ACE-PAMAM-DNA-PAMAM-ACE-FITC with fluorescence tracing function, which can target to tumor cells via folate receptor-mediated endocytosis, through complementary single strand DNA bridging method. To study the tumor targeting of these assembled PAMA