don对balbc小鼠肠道营养代谢的影响word格式论文.docxVIP

上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注DON对BALB/c小鼠肠道营养代谢的影响摘要脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol,DON），又名呕吐毒素，是一种由镰刀菌产生的二级代谢产物。DON广泛存在谷物中，人和畜禽采食被污染的谷物、饲料极易引起呕吐、腹泻、消化吸收抑制、脏器损伤、生长性能和免疫力下降等。肠道作为维护机体健康的天然屏障，是DON产生机体毒性作用的第一攻击对象，不仅破坏肠道免疫系统，而且影响小肠消化吸收，干扰葡萄糖、蛋白质等营养物质的吸收和消化代谢，抑制转运载体活性，从而引起动物营养不良、体重下降、免疫力低下和疾病发生等。肠道微生态系统（Intestinalflora）是机体最重要的组成部分，参与营养物质的代谢、消化、吸收以及机体的生长发育和免疫防御。通常肠道菌群与宿主保持动态平衡，主要集中在大、小肠部位，且不同区域微生物组成存在差异。近年来，DON对肠道系统的影响主要集中在肠道上皮的损害以及免疫功能的破坏。然而肠道微生物作为与机体共生的统一体，DON是否对其也能产生毒性作用，进而引起营养物质吸收、代谢障碍及机体损伤，目前国内外还未曾报道。因此，本试验采用MiSeq 高通量测序技术研究DON对BALB/c小鼠肠道微生物群落结构的影响，并通过消化吸收试验、小肠相关转运载体基因表达情况，探讨DON对BALB/c小鼠的毒性作用，是否通过肠道菌群结构平衡破坏引起营养物质吸收、代谢障碍途径产生，为进一步揭示DON的毒性作用机制提供新的线索和试验参考。本文主要试验内容和结果如下：选取6周龄BALB/c雄性小鼠48只分为4组，每组12只，实验室条件下分别灌胃0、0.2、0.6、1.8 mg/kg.bw剂量DON，试验持续28d。（一）DON致小鼠肠道微生物群落结构变化的宏基因组学研究。结果显示：粪便和盲肠内容物中拟杆菌门（Bacteroidetes）和厚壁菌门（Firmicutes）占比均超过90%。与对照组相比，1.8 mg/kg.bwDON 剂量组拟杆菌门、变形菌门（Proteobacteria）丰度显著降低（P0.05），脱铁杆菌门（Deferribacteres）丰度显著升高（P0.05）；厚壁菌门、疣微菌门（Verrucomicrobia）丰度升高，统计差异不显著（P0.05）。属层次上，DON剂量组中双歧杆菌（Bifidobacterium）和嗜热链I球菌（Streptococcus）丰度下降，统计差异不显著（P0.05）；梭菌属（Clostridium）、弧菌属（Vibrio）丰度显著升高（P0.05）。盲肠内容物菌群丰度分析：与对照组相比，DON 剂量组拟杆菌门显著降低（P0.05），疣微菌门（Verrucomicrobia）显著升高（P0.05），厚壁菌门、变形菌门、脱铁杆菌门丰度增加，统计差异不显著（P0.05）。属层次上，乳杆菌（Lactobacillus）含量较对照组显著降低（P0.05），嗜热链球菌、双歧杆菌变化并不显著（P0.05）；幽门螺杆菌（Helicobacter）、弧菌属丰度上升，统计差异均不显著（P0.05）。结果表明，DON能显著改变肠道菌群结构、多样性和丰度，导致益生菌减少、致病菌增多。（二）DON对肠道营养物质消化、代谢的影响。首先观察不同浓度DON处理对小鼠体重、采食量和脏器系数的影响，后收集不同处理组小鼠粪便，分析DON 对粪便pH值、水分等消化指标的影响。结果显示：与对照组相比，1.8mg/kg.bw DON剂量组小鼠粪便pH比对照组显著升高（P0.05），采食量显著降低（P0.05），体重增重显著降低（P0.05）；0.6mg/kg.bwDON组肝、脾脏脏器系数与对照组显著下降（P0.05），其余无统计学差异。1.8mg/kg.bwDON剂量组含水量显著减少（P0.05），粗蛋白、粗脂肪、粗纤维消化率显著降低（P0.05），0.6mg/kg.bw DON组粗脂肪、粗纤维消化率降低（P0.05）；铜、铁、锌、镁消化率显著下降（P0.05），其余统计差异不显著；缬氨酸（VAL）、赖氨酸（LYS）、丙氨酸（ALA）、脯氨酸（PRO）、酪氨酸（TYR）、天门冬氨酸（ASP）、亮氨酸（LEU）、异亮氨酸（ILE）、精氨酸（ARG）、苏氨酸（THR）、丝氨酸（SER）、谷氨酸（GLU）、甘氨酸（GLY）、苯丙氨酸（PHE）、组氨酸（HIS）的消化率都显著下降（P0.05）；0.6mg/kg.bwDON组氨基酸消化率也下降，0.2mg/kg.bwDON组氨基酸消化率无统计学差异。1.8mg/kg.bwDON剂量组血清总胆固醇（Totalcholesterol,TC）、甘油三酯（Totaltriglyceride,TG）含量显著下降（P0.05），高、低密度脂蛋