dab2基因在胃癌中的表达及相关性分析word格式论文.docxVIP

引言胃癌是人类最常见的恶性肿瘤，是严重威胁人类生命健康的常见病、多发病， 据统计，全世界每年约有 90 万人新诊断为胃癌[1]，在我国胃癌占消化道恶性肿瘤第1 位，全身恶性肿瘤第 3 位。根据卫生部卫生信息统计中心 2001 年公布的资料，恶性肿瘤是我国城市居民的第 1 位死因，死亡率为 135.59/10 万（24.9%）。其中，胃 癌在恶性肿瘤死因中居第 3 位[2]。胃癌的发生发展同其他恶性肿瘤一样，属多因素、 多步骤、多阶段和多基因改变过程，其中有环境因素的影响，有饮食因素的影响， 有机体内部因素的影响，亦有社会心理因素的影响等等。各种因素综合作用，最终 引起癌基因激活、抑癌基因失活以及 DNA 修复基因功能失调，最终导致肿瘤的发 生和发展。因此，在分子生物学水平上研究胃癌的发生发展机制，对于胃癌的预防、 诊断和治疗具有重大意义。DAB2 属于 Disabled (DAB) 基因家族，1994 年，Mok 等[3] 利用 RAP (RNA- based arbitrarily primed PCR technique/ RNA fingerprinting strategy) 技术，研究人正 常卵巢上皮细胞与卵巢癌细胞的基因差异表达时发现，它在正常卵巢上皮细胞中表 达、而在卵巢癌细胞系中是缺失的。所以也被称作卵巢癌缺失基因(Differentially expressed in ovarian cancer 2 ，DOC-2)。人类 DAB2 位于染色体 5p13，长约 35kb， 含有 15 个外显子和 14 个内含子。cDNA 共 3268bp，编码长度为 770 个氨基酸的蛋白质，分子量约为 82. 5 kb[4]。DAB2 广泛存在于正常组织中，但在许多肿瘤组织和 细胞系中低表达或无表达，进一步研究表明它能抑制多种肿瘤细胞系的生长，包括 前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌和绒癌等 [5~9]，所以 DAB2 被认为是一种肿瘤抑制基因。本实验分别采用免疫组织化学 S-P 法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定 30 例胃癌患者癌组织及癌旁正常组织中 DAB2 蛋白和 DAB2mRNA 的表达，分析肿瘤 组织和癌旁正常组织中 DAB2 蛋白和 DAB2mRNA 的表达及其与临床病理资料的关 系，以探讨 DAB2 基因在胃癌诊断及治疗中的应用价值。实验研究一、研究对象选取 2006 年 3 月-2008 年 1 月在山东省千佛山医院胃肠外科接受手术治疗、术前未经放疗和化疗、术后病理学确诊为胃癌的患者 30 例，每例患者分别取肿瘤组织 标本及距肿瘤组织 5cm 处正常胃组织标本。将所取标本分为两组，一组标本经 10% 福尔马林固定，石蜡包埋，常规制备 5μm 厚切片；另一组立即放入-70℃冰箱保存。 30 例患者中，男 24 例，女 6 例；年龄 30-75 岁之间；中分化腺癌 11 例，低分化腺癌 19 例；无淋巴结转移者 10 例，有淋巴结转移者 20 例；肿瘤未侵出浆膜层 9 例， 侵出浆膜层 21 例。根据 1987 年国际抗癌联盟（UICC）公布的胃癌 TNM 临床分期 方法，Ⅰ期 5 例，Ⅱ期 4 例，Ⅲ期 8 例，Ⅳ期 13 例。二、主要试剂及仪器（一）主要试剂1．免疫组化试剂（1）兔抗人 DAB2 多克隆抗体，购于美国 PTG 公司。（2）即用型免疫组织化学超敏 Ultra SensitiveTMS-P 试剂盒： 1）内源性过氧化物酶阻断剂（Endogenous peroxidase blocking solution） 2）正常非免疫动物血清（normal nonimmunone serum） 3）生物素标记的第二抗体（Biotin-conjugated second antibody） 4）辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素（Streptavidin-peroxidase） 此试剂盒购自北京中山生物技术有限公司，由山东省普外科重点实验室提供。（3）Poly-L-Lysine 多聚-L-赖氨酸，取多聚-L-赖氨酸 1 份，蒸馏水 9 份，充分 混合为稀释的多聚-L-赖氨酸溶液。（4）DAB 试剂盒，此试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司，由山东省 普外科重点实验室提供。（5）PBS 溶液，枸橼酸盐缓冲液，DAB 试剂，医用梯度酒精，二甲苯，中性 树胶等均由山东省普外科重点实验室提供。2．RT-PCR 试剂（1）总 RNA 提取试剂盒（Trizol），购自北京全式金生物技术有限公司，由山东省普外科重点实验室提供。（2）RT-PCR 试剂盒，购自北京全式金生物技术有限公司，由山东省普外科重 点实验室提供。（3）DAB2 和内参照 GAPDH 引物，由上海生物工程技术服务公司合成，山东 省普外科重点实验室提供。