dads抑制cd44人胃癌细胞ags干样特性的作用分析word格式论文.docxVIP

DADS 抑制 CD44+人胃癌细胞 AGS“干样”特性的作用研究中文摘要目的肿瘤干细胞(cancer stem cells ,CSCs)/view/10179.htm是肿瘤中具有自我更新能力并能产生异 质性肿瘤细胞的细胞，是肿瘤持续生长的根源。研究发现胃癌中存在胃癌干细胞（gastric cancer stem cells,GCSCs）。本研究的目的在于利用免疫磁珠分选技术 (magnetic cell sorting ,MACS)分选出 CD44(+)AGS 细胞，并从细胞增殖、肿瘤球 形成、分化、耐药性、侵袭迁移及体内致瘤能力等方面，阐明 CD44(+)AGS 细 胞的 GCSCs 样生物学特性；探讨二烯丙基二硫（diallyl disulfide, DADS）对 CD44(+)AGS 细胞生长的抑制作用及对细胞周期的影响，为阐明 DADS 抗胃癌作 用提供重要实验依据。方法MACS 技术分选人胃癌 AGS 细胞中的 CD44(+)AGS 细胞亚群，流式细胞术 检测分选的效率和细胞周期分布；肿瘤球形成实验观察 CD44(+)细胞的增殖能 力；免疫荧光检测 CD44(+)细胞亚群的肿瘤球的分化情况；MTT 实验检测 CD44(+) 和 CD44(-)AGS 细胞亚群对化疗药物氟尿嘧啶和依托泊苷的敏感性；采用迁移侵 袭实验鉴定 CD44(+)和 CD44(-)AGS 细胞亚群迁移侵袭能力；裸鼠体内成瘤实验 分析两个亚群细胞在裸鼠体内的致瘤性；MTT 法观察 DADS 对 AGS 细胞增殖的 影响；流式细胞术、软琼脂集落形成实验等方法，研究 DADS 对 CD44(+)AGS 细胞的增殖、细胞周期的影响。结果1.流式细胞术结果表 明，在 AGS 人 胃 癌 细 胞 系 中 大 约 有 2.8% 的 CD44(+)AGS 细胞，通过免疫磁珠术分选后，CD44(+)AGS 细胞的细胞中 CD44 阳性率高达 99.9 %，而 CD44(-)AGS 细胞的 CD44(+)亚群细胞百分 比只有 0.3%；2.肿瘤球形成实验发现，分选后的 CD44(+)AGS 细胞接种到无血清培养基 中， 2 周后即形成 典型的肿瘤球，其肿瘤球形成率可达 74.3% ；而 2CD44(-)AGS 细胞不具有形成肿瘤球能力；3.流式细胞术显示，CD44(+)AGS 细胞的增殖率为 59.6%，CD44(-)AGS 细 胞的细胞增殖率为 28.3%；免疫荧光观察显示，CD44(+)AGS 细胞可清晰 地观察到胞膜上的绿色荧光，而 CD44(-)AGS 细胞只有个别细胞有弱绿色 荧光，阳性表达率极低；4.分化实验显示，肿瘤球细胞在含血清培养基中贴壁生长，胞质向外伸出突 起，CD44 荧光表达明显减弱，迁移出的细胞包膜上无绿色荧光，在无血 清培养基中肿瘤球细胞 CD44 表达明显，细胞膜上有较强绿色荧光；5.耐药实验结果表明：倒置显微镜下可见，CD44(-)AGS 细胞在化疗药物作 用下细胞数减少明显多于 CD44(+)AGS 细胞；MTT 结果显示，CD44(-)AGS 细胞对化疗药物 5-FU 和 VP-16 的敏感性明显高于 CD44(+)AGS 细胞；6.侵袭转移实验结果表明，转移及侵袭至微孔膜下层的 CD44(+)AGS 细胞均 比 CD44(-)AGS 细胞多；7.裸鼠成瘤实验显示，CD44(+)AGS 细胞中 2×103 个细胞组未成瘤，2×104 个细胞组成瘤率为 75%，2×105 个细胞组成瘤率 100%，且瘤体较大，而 CD44(-)AGS 细胞各组均无裸鼠成瘤；8.DADS 对 CD44(+)AGS 细胞抑制作用实验中，软琼脂集落实验显示 DADS 可呈浓度依赖性抑制 CD44(+)AGS 细胞增殖，流式细胞仪检测经 DADS 处理后的 CD44(+)AGS 细胞周期阻滞于 G2/M 期，且呈浓度和时间依赖性。结论1. CD44（+）AGS 细胞具有胃癌干细胞样生物学特性。2.DADS 可抑制 CD44（+）AGS 细胞增殖，其机制与阻滞细胞周期于 G2/M期有关。关键词: 胃肿瘤；肿瘤干细胞；CD44；二烯丙基二硫3the Inhibition Effect of DADS on Stemness Characteristic of CD44 + Human Gastric Cancer Cells AGSABSTRACTObjective: Cancer stem cells (CSCs) is a unique tumor cells with the ability of self-renewal and can produce a heterogeneous tumor cells, and is the source