组培教案2.docVIP

第 2 次课 授课名称 第一章 植物组培实验室的构建和操作技术 第一节 组培实验室和小工厂的设计与设备 学时数 2 教学目标 理解组织培养实验室设计；掌握组织培养常用的实验仪器设备及其使用方法。组织培养实验室设计组织培养实验室设计(cleaning room) 1、主要功能：用于完成玻璃器皿等仪器的清洗、干燥和贮存。 2、设计要求：根据工作量大小决定大小，一般10m2左右。要求房间宽敞明亮，方便多人同时工作；室内应配备电源、大型水槽，最好是白瓷水槽。为防止碰坏玻璃器皿，可铺垫橡胶，上下水道要畅通。 3、仪器与用具配置：有工作台、烘箱、晾干架、周转筐（塑料或铁制）、各种规格的毛刷、药品柜等。 （二）准备室(repairing room) 1、主要功能：完成培养基、、植物材料的预处理、高压灭菌等工作。 2、设计要求：一般10-20 m2，要求明亮、通风、干燥、清洁卫生，室内应配备电源、水槽，上下水道要畅通。 3、仪器与用具配置：压力灭菌锅、干热灭菌器、细菌过滤装置、工作台、换气扇、医用小推车、电子分析天平、托盘天平、蒸馏水器、酸度计、恒温水浴锅、电炉、普通冰箱等仪器设备；移液管、移液管架等。器械柜和药品柜。 （三）缓冲室 1、主要功能：防止带菌空气进入接种室和工作人员进出接种室时带进杂菌。进入无菌室前要在缓冲室里换上经过灭菌的卫生服、拖鞋，戴上口罩。 2、设计要求：一般2-3 m2，空间清洁，墙壁光滑平整，在缓冲间和接种间之间用玻璃隔离，配制平滑门，以便参观。 3、仪器与用具配置：紫外线灯、小洗手池、搁架、鞋架、衣帽钩、拖鞋、工作服、实验帽和口罩等。 （四）无菌室（transfering room） 1、主要功能：进行植物材料的分离接种及培养物转移的一个重要操作室。其无菌条件的好坏对组织培养成功与否起重要作用。 2、设计要求：在工作方便的前提下，接种室宜小不宜大，一般7～8m2，要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。接种室要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置吊装1-2盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。 3、仪器与用具配置：超净工作台、空调机、解剖镜、接种器具消毒器、紫外线灯、酒精灯、手持喷雾器等。 （五)培养室（culturing room）????? 1、主要功能：接种材料进行培养生长的场所。 2、设计要求： （1）培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。高度比培养架略高为宜，周围墙壁要求有绝热防火的性能。 （2）培养材料放在培养架上培养。培养架大多由金属制成，一般设5层，最低一层离地高约l0cm，其他每层间隔30cm左右，培养架即高1.7m左右。培养架长度都是根据日光灯的长度而设计，如采用40W日光灯，则长1.3m，30W的长lm，宽度一般为60cm。 （3）培养室最重要的因子是温度，一般保持在20～27℃左右，具备产热装置，并安装窗式或立式空调机。由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度，最好不同种类有不同的培养室。室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在70％～80％为好，可安装加湿器。 （4）控制日光照时间可安装定时开关钟，一般需要每天光照10～16h也有的需要连续照明。短日照植物需要短日照条件，长日照 植物需要长日照条件。现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源，这样不但可以节省能源，而且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。在阴雨天可用灯光作补充。 （六）驯化室 驯化室要求清洁无菌，配有空调机、加湿器、恒温恒湿控制仪、喷雾器、光照调节装置、通风口以及必要的杀菌剂。 三、仪器设备和器皿用具 （一）仪器设备（见实验室设计） 1．超净台，优点是操作方便自如，比较舒适，工作效率高，准备时间短。开机10分钟即可操作，可进行长时间使用。在工厂化生产中，接种工作量很大，需要经常长久地工作时，超净台是很理想的设备。超净台功率在145～260W左右，它装有小型鼓风机，使空气穿过一个前置过滤器，在这里把大部分空气尘埃先过滤掉，然后再使空气穿过一个细致的高效过滤器，它除去了大于0.3um的尘埃、细菌和真菌孢子等，最后以较洁净的气流吹到工作台面。超净空气的流速为每分钟24～30m，这已足够防止附近空气袭扰而引起的污染，这样的流速也不会妨碍采用酒精灯对器械等的灼烧消毒。在这样的无菌条件下操作，就可以保证无菌材料在转移接种过程中不受污染。超净台分水平式和垂直式二种型号。 2．无菌箱，在投资少的情况下，可以用接种箱来代替超净台。接种箱依靠密闭、药剂熏蒸和紫外灯照射来保证内部空间无菌。但操作活动受限制，准备时间长，工作效率低。 3．空调机，保证室内温度，一般