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一,概述 紫外-可见-近红外分光光度计( UV-VIS-NIR Spectroscopy)是利用某些物质的分子吸收紫外(200~400nm)、可见光(400~780nm)、近红外(780~3 000nm)区域的辐射来进行分析测定的方法。广泛用于有机和无机物质的定性和定量测定以及纯度鉴定、结构分析。被工农业各个部门和科学研究的各个领域所广泛采用,成为人们从事生产和科研的有力测试手段。 。 二、基本原理 1,透过率 T% =(I/I0)*100% 2,Lambert-Beer 定律 当入射光波长一定时,待测溶液的吸光度A与其浓度和液层厚度成正比,即 k 为比例系数,与溶液性质、温度和入射波长有关。 ? 当浓度以 g/L 表示时,称 k 为吸光系数,以 a 表示,即 ? 当浓度以mol/L表示时,称 k 为摩尔吸光系数,以? 表示,即 ? 越大,表示方法的灵敏度越高。? 常以??表示。 三,特点 1 灵敏度高:许多元素的摩尔吸光系数由原来的几万提高到数十万 2 准确度高:误差可减少到0.X% 3 分析成本低、操作简便、快速、应用广泛: 在国际上发表的有关分析的论文总数中,光度法约占28%,我国约占所发表论文总数的 33% 4 结构复杂、体积大、光谱扫描时间长 四、主要参数 1,波长准确度 波长的实际测定值与理论值(真值)之差 2,波长重复性 多次波长测试数据的离散性 3,光度准确度 光度的实际测定值与理论值(真值)之差。 (1)吸光度准确度和吸光度误差用AA(或△A)表示; (2)透射比准确度或透射比误差,用TA(或△T)表示 4,光度重复性 多次测量(一般为3~5次)中,最大值与最小值之差 5,杂散光 不应该有光的地方有光 五、仪器的基本构造 1. 光源 钨灯和碘灯:340~2500nm 氢灯和氘灯 :200~375nm。 2.单色器 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。 3. 样品室 液体和固体样品架 4. 检测器 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号,光电池、光电管或光电倍增管,pbs、INGAS。 5. 结果显示记录系统 检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理。 六、UV-VIS-NIR分光光度计的分类 按其光学系统可分为单波长分光光度计和双波长分光光度计。 1,单波长分光光度计 (1)单波长单光束分光光度计 国产721型、751型、XG-125型、英国SP500型和伯克曼DU-8型等。 (2)单波长双光束分光光度计 国产710型、730型、740型、日立UV-340型等 2,双波长分光光度计 双波长分光光度计的优点:是可以在有背景干绕或共存组分吸收干忧的情况下对某组分进行定量测定。 国产WFZ800-5型、岛津UV-260型、UV-265型等。 七、双波长双光束紫外光路图 uv3600 八、发展趋势 1,小型便携分光光度计 OceanOptics(海洋光学)的S系列、USB2000及PC200 2,快速扫描分光光度计 美国VARIAN公司Cary50扫描速度可高可达 2400Onm/min,扫描190一1100nm只需要3秒。 3,高灵敏度 岛津UV-360O波长范围可达185一330Onm,InGAS检测 器覆盖了光电倍增管和PbS检测器的薄弱范围,保证了整个测试范围的高灵敏度,它在1500nm可以达到小于0.00003AbS的光度噪声,是现在世界上的最高的灵敏度。 4,多光束 HITACHI(日立)公司的最新UV-4100是双单色器,双光束紫外/可见/近红外光谱。 5,机刻光栅到全息光栅 BeckmanCoulter作为一家老牌生产分光光度计的公司,该公司的DU700/U800,采用的是传统单光路系统,使用全息凹面光栅。 全息光栅的特点: 无鬼线,杂散光极小;分辨率高;衍射效率较低。 九、UV3600操作流程 1,开空调使温度升至15摄氏度 2,开分光光度计电源 3,打开电脑及软件UVProbe 4,点击“connect”按钮,弹出“system initialization”对话框,开始初始化 5,激活“spectrum”按钮,点击M按钮进行参数设置。如测试范围在可见光区,狭缝宽度定位2.0nm,在红外区域内,狭缝宽度应设为5.0nm。 6,点击“baseline”进行基线校准。 7,点击“GO TO WL”(wavelength= ) 8,点击“auto zero”进行坐标校准 9,放置样品,点击“star”开始测试,测试完
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