dznep对molt4细胞株mob1ab基因启动子区组蛋白h3k9甲基化及其对该基因表达水平的影响word格式论文.docx

英文略缩词Abbreviations英文缩略词英文全称中文译名AL ALLacute leukemiaacute lymphocytic leukemia急性白血病 急性淋巴细胞白血病cDNA complementary DNA 互补 DNATris tris(hydroxymethyl) aminomethane 三羟甲基氨基甲烷 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 TEMED etramethylethylenediamine 四甲基乙二胺 PAGE polyacrylamide gel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 WB Western blot 蛋白质免疫印迹 PBS phosphate buffered solution 磷酸盐缓冲液 DEPC diethyl pyrocarbonate 二乙基焦磷酰胺 TBST Tris-Buffered Saline Tween-20 三羟甲基氨基甲烷缓冲盐水RT-qPCRreal-time fluorescence quantitativereverse transcription PCR实时荧光定量聚合酶链反应CCK-8Cell Counting Kit-8细胞计数试剂盒-8DNMTDNA methyhransferasesDNA 甲基转移酶BSPBisulfite sequencing PCR硫化测序 PCR PIPropidiumIodide碘化丙啶MDSDZNepMyelodysplastic Syndrome 3-Deazaneplanocin A骨髓增生异常综合征3-去氮腺嘌呤DZNep 对 Molt-4 细胞株 MOB1A/B 基因启动子区组蛋白 H3K9 甲基化及其对该基因表达水平的影响 摘要目的：探讨急性白血病患者 MOB1A/B 基因的表达水平及其临床意义，进一 步 以 白 血 病 Molt-4 细 胞 株 为 模 型 ， 探 讨 组 蛋 白 甲 基 化 酶 抑 制剂 3- Deazaneplanocin A（DZNep）对 MOB1A/B 基因启动子区组蛋白 H3K9 甲基化水平 及基因表达水平的影响，为急性白血病的治疗提供一个新的方向。方法：应用 Real-time qPCR 及 Western blot 方法检测 MOB1 基因在急性白 血病患者与正常对照中的差异表达；予 DZNep 作用于 Molt-4 细胞后，采用 CCK-8 法观察细胞的增殖情况、Annexin V FITC/PI 流式细胞仪检测凋亡率、 Real-time qPCR 检测 MOB1A/B 基因的表达情况、Western blot 鉴定 MOB1A/B 蛋 白的表达变化；BSP 检测 MOB1A/B 基因启动子区 CpG 岛甲基化状态；采用染色 质免疫共沉淀技术检测 DZNep 对白血病 Molt-4 细胞株 MOB1A/B 基因启动子区域 组蛋白 H3K9 甲基化的影响。结果：1、与正常人对照组相比，MOB1A/B基因在急性淋巴细胞白血病患者 中的表达量减少。2、DZNep能够明显抑制Molt-4细胞株的增殖，并促进其凋 亡；DZNep作用于Molt-4细胞株后，MOB1B基因的表达有所增加，MOB1A基因的表 达增加不明显。3、Molt-4细胞株中，MOB1A基因启动子区CpG岛呈高甲基化状 态，MOB1B CpG岛的甲基化水平极其低下。4、DZNep作用于Molt-4细胞株后， MOB1A/B 基因启动子区域组蛋白H3K9甲基化水平明显降低（单甲基化、双甲基 化、三甲基化水平均呈现不同程度的下降）。结论：Hippo 信号通路核心成员 MOB1A/B 基因在急性白血病患者的白血病 细胞中存在着低表达的现象，与其启动子区组蛋白 H3K9 甲基化修饰和/或 CpG 岛的高甲基化修饰密切相关；组蛋白甲基化酶抑制剂 DZNep 能够逆转该基因启 动子区组蛋白 H3K9 的甲基化修饰水平，逆转 MOB1B 基因的表达，同时明显抑制 Molt-4 细胞株的增殖，并促进其凋亡。为 Hippo 信号通路在急性白血病发生与 发展中的作用研究奠定了实验基础，为急性白血病的治疗提供一个新的方向。关键词：急性白血病，表观遗传学，Hipoo 信号通路，MOB1 基因，组蛋白甲基化酶抑制剂The Effect of DZNep on the Methylation Status of Histone H3-lysine 9 at the Promoters of MOB1A/B Genes and its Effect on the Gene Expression in Leukemia Molt-4 Cell Line AbstractO