ets2对食管鳞癌细胞生长 侵袭及mtorp70s6k分子信号调控作用word格式论文.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 研究 Ets2 表达下降对食管鳞癌细胞生物学行为的影响，初步探讨 Ets2 在食管鳞 癌发生发展中的作用。 本课题主要分为两部分： 第一部分：检测转录因子 Ets2 在食管鳞癌细胞株 EC1、Eca109、EC9706 中 的蛋白表达情况。 第二部分：研究转录因子 Ets2 在食管鳞癌发生发展中的作用。通过靶向特 异性的 siRNA 阻断 Ets2 基因表达，检测 Ets2 表达下调对食管鳞癌细胞株增殖、 侵袭、周期和凋亡的影响，并检测 mTOR-p70S6K 信号通路主要蛋白的表达情况， 初步研究 Ets2 基因在食管鳞癌细胞中的生物学效应及作用机制。 方法： 1. 食管鳞癌细胞中转录因子 Ets2 的表达情况 利用 Western blot 技术从蛋白水平检测转录因子 Ets2 在正常食管上皮细胞 Het-1A 和食管鳞癌细胞株 EC1、Eca109、EC9706 中的表达。 2. 转录因子 Ets2 对食管鳞癌调控作用的初步探索 体外化学合成 3 对针对 Ets2 基因 mRNA 的特异性 siRNA，采用脂质体法转 染食管鳞癌细胞株，通过 Real-time PCR 和 Western blot 筛选效率最高的 siRNA 片段。利用筛选到的 siRNA 转染食管鳞癌细胞，以转染非特异性 siRNA 的细胞、 未转染 siRNA 的细胞及只加入了转染试剂的细胞作为对照，采用 EdU 荧光标记 法 和 CCK-8 法 检 测 食 管 鳞 癌 细 胞 增 殖 率 和 细 胞 存 活 率 的 变 化 ； 利用 AnnexinV-FITC/PI 双染法及 caspase-3 的蛋白水平表达情况分析细胞凋亡的变 化；流式细胞仪检测食管鳞癌细胞周期的变化；Transwell 小室法检测食管鳞癌 细胞侵袭能力的变化，Western blot 检测 E-cadherin 的表达情况来反应食管鳞癌 细胞粘附能力的变化；通过 Western blot 检测 mTOR/p70S6K 途径主要蛋白的表 达水平变化。 结果： II 1. 食管鳞癌细胞中转录因子 Ets2 的表达情况 Western blot 结果显示，转录因子 Ets2 在正常食管上皮细胞和食管鳞癌细胞 株中均有表达，与正常食管上皮细胞 Het-1A 相比，Ets2 在食管鳞癌细胞 EC1、 Eca109 和 EC9706 中的蛋白表达量均明显升高，尤其在 EC9706 细胞中增加最为 显著，因此采用 EC9706 细胞筛选 siRNA 干扰片段。 2. 转录因子 Ets2 对食管鳞癌调控作用的初步探索 3 对 Ets2 基因的特异性 siRNA 干扰片段中，Ets2 siRNA1 在转染 48 h 后， 转录水平和蛋白水平的沉默效果相对较好，因此选用 Ets2 siRNA1 片段转染食管 鳞癌细胞系 EC1、Eca109、EC9706 进行后续实验。与对照组相比，靶向 siRNA 下调 Ets2 基因表达后，可以明显地抑制食管鳞癌细胞的增殖；Ets2 siRNA 组的 食管鳞癌细胞的早期凋亡比例上升，凋亡蛋白 caspase-3 的蛋白水平表达增多， 说明下调 Ets2 基因能够促进细胞凋亡；Ets2 表达下调的食管鳞癌细胞 Eca109、 EC1 的 G0/G1 期细胞明显增加；减弱食管鳞癌细胞侵袭能力，且 E-cadherin 的 蛋白表达上升说明食管鳞癌细胞的粘附能力增强；此外，Western blot 检测显示 Ets2 siRNA 组 mTOR/p70S6K 信号通路中的关键蛋白 p-mTOR 和 p-p70S6K 的表 达量明显下降。 结论： 1. 转录因子 Ets2 在三株食管鳞癌细胞中均呈高表达； 2. 靶向 siRNA 下调 Ets2 表达后，食管鳞癌细胞的增殖能力减弱，促进细胞 凋亡，细胞周期被阻滞在 G0/G1 期，细胞的侵袭能力减弱，说明转录因子 Ets2 表达下调能够有效抑制食管鳞癌细胞生长和侵袭； 3. Ets2 表达下调的食管鳞癌细胞株中，mTOR/p70S6K 中关键因子表达量明 显下调，初步推测 Ets2 可能通过 mTOR/p70S6K 信号通路在食管鳞癌发生发展 中发挥作用。 关键词：Ets2；食管鳞癌；siRNA；生长；侵袭；mTOR/p70S6K III Abst Abstract The regulation of Ets2 on growth, invasion and mTOR/p70S6K molecular signal of esophageal squamous cancer cells Abstract Esophageal cancer (EC)，which is one of