fasfasl信号转导通路在pbde 47致sh sy5y细胞凋亡中的作用word格式论文.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 中有十分重要的作用，细胞凋亡过程的异常与诸多疾病的发生和发展存在密切的联 系，而且与许多外源化合物的毒性作用有重要关系。本实验室前期的研究发现，PBDEs 同系物 PBDE-47 可诱导原代培养的海马细胞和人神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞发生氧 化应激和细胞凋亡；此外，Madia 等实验研究发现 PBDE-99 可引起人脑星形细胞瘤细 胞凋亡。进一步的研究发现，PBDE-47 诱导 SH-SY5Y 细胞凋亡与 caspase-3、caspase-12、 细胞色素 C 和 DAPK mRNA 表达水平升高有关，表明 PBDE-47 可能通过三条经典凋 亡途径（线粒体、内质网和死亡受体等途径）诱导 SH-SY5Y 细胞凋亡，但具体哪条 通路是 PBDE-47 诱导细胞凋亡的主要途径及其作用机制尚不清楚，有待进一步研究。 Fas/FasL 信号通路是一种典型的细胞凋亡死亡受体信号转导通路，且作用机制目前比 较明确。近年来研究表明，神经系统普遍表达 Fas 和 FasL，且在多种神经性疾病中其 表达明显升高，提示 Fas/FasL 系统在神经系统中具有重要作用。目前，关于 Fas/FasL 信号通路在 PBDEs 神经毒性中的作用尚未见报道。 基于上述理由，本实验拟通过培养 SH-SY5Y 细胞接触不同剂量的 PBDE-47，观 察 PBDE-47 对细胞凋亡率、caspase-3、Fas、FasL、caspase-8 基因和蛋白表达水平的 影响，从而探讨 Fas/FasL 信号通路在 PBDE-47 致 SH-SY5Y 细胞凋亡中的作用。 本研究主要由以下二部分组成 第一部分 PBDE-47 对 SH-SY5Y 细胞凋亡、Fas、FasL、procaspase-8、procaspase-3 蛋白和 caspase-3、Fas mRNA 表达水平的影响 目的：探讨 PBDE-47 对 SH-SY5Y 细胞凋亡率、Fas、FasL、procaspase-8、procaspase-3 蛋白和 caspase-3、Fas mRNA 表达水平的影响。 方法：体外培养的 SH-SY5Y 细胞暴露于不同浓度的 PBDE-47（1、5、10 μmol/L）， 以二甲基亚砜（DMSO）为溶剂对照组，染毒 24 h 后，应用流式细胞术、Western blot 和 RT-PCR 技术分别检测细胞凋亡率、Fas、FasL、procaspase-8、procaspase-3 蛋白和 caspase-3、Fas mRNA 的表达水平。  结果：10 μmol/L PBDE-47 染毒组细胞的早期凋亡率和总凋亡率明显高于对照组、 1、5 μmol/L PBDE-47 染毒组（P﹤0.05）；与对照组相比，各染毒组 procaspase-3 蛋白 表达均明显下降（P0.05）；而各染毒组 Fas 和 procaspase-8 蛋白表达与对照组相比差 异均无统计学意义（P0.05）；1 μmol/L PBDE-47 染毒组 FasL 蛋白与对照组相比表达 升高（P0.05），但 5、10 μmol/L PBDE-47 染毒组 FasL 蛋白表达与对照组比较差异无 统计学意义（P0.05）；与对照组相比，各染毒组 caspase-3 mRNA 表达均明显升高 （P0.05）；而各染毒组 Fas mRNA 表达与对照组比较差异均无统计学意义（P﹥0.05）。 结论：一定剂量的 PBDE-47 可诱导 SH-SY5Y 细胞凋亡，引起 caspase-3 mRNA 表达升高和 procaspase-3 蛋白表达下降，然而 Fas、FasL、procaspase-8 蛋白和 Fas mRNA 表达却没有变化。 第二部分 Fas 受体拮抗剂 ZB4 对 PBDE-47 致 SH-SY5Y 细胞凋亡和 procaspase-3 蛋白表达的影响 目的：探讨 Fas 受体拮抗剂 ZB4 对 PBDE-47 致细胞凋亡和 procaspase-3 蛋白表达 的影响。 方法：体外培养的 SH-SY5Y 细胞暴露于 10 μmol/L PBDE-47 和/或 Fas 受体拮抗 剂 ZB4，DMSO 为溶剂对照组，染毒 24 h 后，检测细胞凋亡率和 procaspase-3 蛋白表 达情况。 结果：Fas 受体拮抗剂 ZB4 单独暴露对细胞凋亡率和 procaspase-3 蛋白表达没有 影响（P﹥0.05）；与 PBDE-47 单独染毒组相比，ZB4 与 PBDE-47 联合染毒对 SH-SY5Y 细胞凋亡率和 procaspase-3 蛋白表达没有明显变化（P﹥0.05）。 结论：结合第一部分实验结果，说明 Fas/FasL 信号转导通路可能