骨髓间充质干细胞诱导肾移植免疫耐受的临床初步分析word格式论文.docxVIP

骨髓间充质干细胞诱导肾移植免疫耐受的临床初步研究硕士研究生：徐璐导师：潘光辉教授中文摘要背景：肾移植是目前治疗终末期肾病最有效的方法，但移植后需长期服用免疫抑制剂。免疫抑制剂并不能完全避免排斥反应的发生，同时增加了患者经济、心理负担，也增加了感染、肿瘤等发生机会，因此寻找一种减少甚至停用免疫抑制剂的有效办法是广大医患人员的迫切需要。骨髓间充质干细胞（Mesenchymalstemcells，MSCs）因其组织修复、免疫调节等特性在移植免疫耐受的应用中受到人们的重视，成为免疫治疗中最有前景的一类细胞，目前国内外已有大量的体外及动物实验研究，证实了MSCs在移植免疫耐受中的作用，但缺乏相关的临床实验，且输注MSCs的方式、剂量、时间点都尚无定论，要达到理想的耐受状态仍面临巨大的挑战。目的：通过在肾移植术中经移植肾动脉及术后经静脉输注骨髓间充质干细胞，术后减少免疫抑制剂用量。观察一般情况、尿量、排斥反应发生率、移植肾存活率，监测肾功能、实验室指标等，探讨输注骨髓间充质干细胞诱导免疫耐受的作用和机制及减少免疫抑制剂剂量的可行性。方法：随机选择2009-9-1至2009-12-31期间我中心拟行亲属活体供肾移植的6例慢性肾功能不全（尿毒症期）患者，随机分为输注骨髓间充质干细胞的实验组及不输注骨髓间充质干细胞的照组。MSCs来自第三方健康供体自愿捐献的骨髓，经严格无菌分离、纯化、扩增。实验组于活体肾移植手术过程中在移植肾动脉吻合口固定一留置针，开放移植肾血流时，经移植肾动脉以输血器加压快速输注骨髓间充质干细胞5×106个，术后1月经外周静脉输注第二次骨髓间充质干细胞2×106/kg，术后长期使用低剂量口服免疫抑制剂他克莫司（FK506）0.05mg·kg-1·d-1，吗替麦考酚酯（MMF）20mg·kg-1·d-1，强的松15mg/天，对照组服用标准剂量免疫抑制剂，FK5060.08mg·kg-1·d-1，MMF20mg·kg-1·d-1，强的松15mg/ 天。密切观察术后可能发生的并发症及移植肾功能恢复情况，监测肾功能、肝功能、血常规、FK506浓度等临床指标，检测淋巴细胞亚群、混合淋巴细胞反应、细胞因子等了解受体免疫状态。结果：6例患者手术过程顺利，对照组中1例于术后第7天发生移植肾区胀痛、无尿及血肌酐升高，移植肾彩超示移植肾周血肿，临床诊断为移植肾急性排斥反应，经甲强龙0.25g连续3天，ATG100mg连续5天治疗后逆转，肾功能恢复正常。对照组:术后1月血肌酐平均88umol/L，术后3月平均100umol/L。3月内未出现移植肾栓塞、感染、移植物抗宿主病等并发症。Treg比例术前平均5.04%，术后1月平均2.53%。CD19+CD5+B淋巴细胞比例术前平均28.61%，术后1月平均29.72%。CD19+CD27+B淋巴细胞比例术前平均60.6%，术后平均47.29%。NK细胞比例术前平均2.66%，术后平均5.59%。混合淋巴细胞培养刺激指数术前平均0.125，术后平均0.3399。PMA刺激的TNF-α术前平均51.16%，术后1月平均36.14%。IFN-γ术前平均31.59%，术后1月平均22.51%。IL-10术前平均1.81%，术后1月平均5.93。IL-4术前平均0.48%，术后1月1.98%。实验组:术中、术后骨髓间充质干细胞输注过程顺利，移植肾功能恢复良好。术后1月血肌酐平均131.3umol/L,术后3月平均134 umol/L。移植过程中、移植后未发生栓塞、感染、移植物抗宿主病等并发症，未发生移植肾排斥。实验组Treg比例术前平均5.78%，术后1月平均5.29%，其中两例术后较术前增加，高于对照组。CD19+CD5+B淋巴细胞术前平均25.51%，术后1月平均18.73%，较对照组减少。CD19+CD27+B淋巴细胞比例术前平均28.85%，术后平均36.86%，对照组则降低。NK细胞比例术前平均10.1%，术后平均8.38%，对照组升高。混合淋巴细胞培养刺激指数术前平均0.1003，术后1月平均0.185，明显低于对照组。PMA刺激的实验组TNF-α术前平均47.78%，术后平均46.83%，其中两例术后增加，对照组则降低。IFN-γ术前平均27.51%，术后1月平均40.92%，对照组下降。IL-10术前平均3.45%，术后1月平均9.4%。IL-4术前平均0.86%，术后1月21.95%。结论：在术中经移植肾动脉和术后经静脉输注骨髓间充质干细胞是安全可行的；输注骨髓间充质干细胞可改变活体肾移植受者免疫状态，可减少患者免疫抑制剂用量。关键词：骨髓间充质干细胞；肾移植；免疫耐受Preliminary Clinical Study on the MSCs Inducing Tolerance in R