华佗豆提取物抗瘢痕的实验分析word格式论文.docxVIP

中 文 摘 要目 的：通过对华佗豆提取物体外抗瘢痕的细胞实验和动物实验，研 究其对小鼠成纤维细胞（NIH3T3）和人增生瘢痕成纤维细胞（HKF） 增殖的影响及对兔耳增生瘢痕的防治作用，评价华佗豆提取物的抗瘢痕 作用。为进一步开发华佗豆和研制有效的外用抗皮肤瘢痕药物提供理论 和实验依据。方 法：1、采用系统溶剂提取法对华佗豆进行提取。2、采用 MTT 法 体外测定华佗豆提取物对小鼠成纤维细胞和人增生瘢痕成纤维细胞作 用的影响。3、以一次给药和多次给药的方法，将华佗豆 70%醇提取物 制成的凝胶剂及凝胶基质分别外涂于家兔背部去毛区的完整皮肤和破 损皮肤，观察其产生家兔皮肤刺激性反应。4、采用华佗豆 70%醇提取 物自制的凝胶剂对实验家兔进行增生瘢痕的预防和治疗，预防组于造模 当天用药，术后 30 天耳部瘢痕取材，治疗组于术后 28 天用药，术后60 天将动物处死，耳部瘢痕取材，组织均用 10%甲醛固定，石蜡包埋， 切片，然后进行 HE 染色及 VG 染色，大体观察和光镜观察瘢痕区形态 学的改变，检测瘢痕组织的增生指数(HI)、成纤维细胞数密度(NA)及胶 原纤维面积密度(AA)。结 果：1、本实验采用系统溶剂提取法，加热回流提取分别得到水提 物、70%醇提物和 95%醇提物 3 个提取物。2、华佗豆 3 种提取物对小 鼠成纤维细胞的生长均有不同程度的促进作用，而对人增生瘢痕成纤维 细胞的增殖有不同程度的抑制作用，且抑制率呈时间依赖性，两者实验 结果显示 70%醇提物对小鼠成纤维细胞促进生长的作用效果最好，且 对人增生瘢痕成纤维细胞的抑制作用最强。3、华佗豆凝胶剂对家兔完 整皮肤一次用药和多次用药的平均反应分值均0.5 分，表明其对家兔正 常皮肤无刺激性；一次给药对家兔破损皮肤在用药后 1h 平均反应分值 为 0.67 分0.5 分，但2.0 分，表明其对家兔破损皮肤有轻度刺激性，但在用药后 24h 后刺激性消失。多次给药对家兔破损皮肤，在末次用药后 1h 平均反应分值为 0.33 分0.5 分，表明华佗豆凝胶剂对家兔破损皮 肤无刺激性。4、对各组兔耳瘢痕标本进行观察和分析：（1）大体观察： 不处理组及基质组：瘢痕明显凸起皮缘，且凹凸不平，质地较周围组织 硬，色红。实验组：瘢痕略隆起于皮肤，瘢痕组织较平坦，柔软，质地 基本同周围组织，但局部稍硬，小部分地区色略红。（2）光镜下观察： 不处理组、基质对照组瘢痕均明显高于各自周围正常组织，成纤维细胞 数目多且密集，胶原纤维排列紊乱；实验组：瘢痕稍高于周围正常组织， 胶原纤维较稀疏，排列较整齐，大部分呈束状。（3）实验组的增生指 数 HI、成纤维细胞数密度 NA 及胶原纤维面积密度 AA 均小于不处理 组和基质对照组（p0.01 或 p0.05）。结 论：华佗豆 3 种提取物既能促进小鼠成纤维细胞的生长又能抑制 人增生瘢痕成纤维细胞的增殖。华佗豆凝胶剂可以抑制动物实验性皮肤 瘢痕的增生，对家兔完整皮肤及多次给药对家兔损伤皮肤均无刺激性。 可见，华佗豆提取物具有较显著的抗瘢痕作用，很有潜力开发为外用抗 皮肤瘢痕药物。关键词：华佗豆提取物；小鼠成纤维细胞；人增生瘢痕成纤维细胞； 皮肤刺激性；兔耳瘢痕Study of extracts from Semen Calonyctionis Muricati on anti-skin scarABSTRACTObjective: This study was aimed to investigate the effects of extracts from Semen Calonyctionis Muricati on the proliferations of mouse fibroblast cells and hypertrophic scar fibroblasts and prevention of hypertrophic scar formation.Methods: The extracts isolated from Semen Calonyctionis Muricati by solvent-extraction process. The viability of mouse fibroblast cells and hypertrophic scar fibroblasts were assessed by MTT assay. Gelata mixed with 70% alcohol extracts and its carbomer was applied on the hairless skin and damaged skin of rabbit’s back and the stimulation to the sk