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等电点沉淀法实例 酪蛋白等电点沉淀法快速鉴别奶粉和乳清粉 前言：奶粉和乳清粉在外观上很相近, 水溶液性状亦相似, 直接很难区分。 实验原理 乳清粉不含酪蛋白, 只含乳清蛋白, 而常规的 全脂奶粉、脱脂奶粉以及其他调制奶粉等均含 有酪蛋白。实验中, 以酸调节待测样品水溶液 pH 值至4.6 附近，奶粉溶液有白色絮状凝块 从溶液中沉淀出来, 乳清粉溶液,则无此沉淀反 应, 利用这个现象立即就可以将奶粉和乳清粉 区别开来。 实验部分 试剂： 盐酸(1+ 19) : 量取10m l 盐酸, 加水稀释至200m l。 精密pH 试纸(pH318- 514)。 鉴定方法及结果判断 取约015g 样品置烧杯中, 加入10m l 水, 搅拌溶解成 均匀溶液, 用吸管逐滴滴入盐酸(1+19) , 边滴边摇匀,并 用试纸测其pH 值, 当pH 值在416 或其附近(如418- 411) 时, 观察有无白色絮状凝块生成。若有, 即为奶粉, 若溶液仍呈乳浊状, 无凝块形成, 即为乳清粉。 讨论 等电点现象是蛋白质、氨基酸的特点之一。蛋 白质由多个氨基酸分子以肽键连接而成，具有 两性离解性质, 其离解情况复杂, 总离解可用下 式表示(其中P 代表蛋白质) : 参考文献 [1 ] 杭州商学院教材, 乳与乳制品工艺学, 1992 年。 [2 ] 郑集编, 普通生物化学, 高等教育出 版社, 1989 年。 人血清小分子蛋白质分离中等电点沉淀法的探索 目的:探索经等电点沉淀法去除高丰度蛋白后用聚丙烯 酰胺凝胶电泳分离血清中小分子量( 10 kD)蛋白质的 方法。 方法:血清经U9处理后加不同pH值的缓冲液沉淀高丰 度大分子量蛋白,取上清超滤(MW = 3kD)浓缩、置换, 用Tricine - SDS - PAGE电泳检测。 实验步骤 缓冲液的配制 预分离血清 Tricine - SDS - PAGE电泳分离检测 Brandford法测定不同pH缓冲溶液沉淀后上清液的蛋白质浓度。 结果 Tricine - SDS - PAGE电泳检测分析 * *