酶解法提取补骨脂中补骨脂素的工艺探究.ppt

酶解法辅助提取补骨脂中补骨脂素的工艺探究 申请专业及年级：2007级药物制剂班 指导老师：李锦、张师愚 课题负责人： 丁姣姣 成员：丁姣姣、李亚辉、张文芳、 杨建、刘国婷、杜建华 研究背景 补骨脂素药理作用 对治疗白癜风、银屑病有特效，还有抗肿瘤、抗病毒、抗凝血及类雌激素作用； 目前补骨脂素按部颁标准醇提法提取率较低，补骨脂素目前已经可以合成，但成本很高且操作繁琐； 中药提取是中药开发的一个重要环节，提取工业占很大的市场份额； 酶解法是一种新的生物提取技术，应用于中药提取，可显著提高提取效率。 目的：确定复合酶辅助提取补骨脂中补骨脂素的最佳工艺条件，以提高其提取率。 研究特色： 首次用复合酶来辅助提取补骨脂中补骨脂素，以提高其提取率，并考虑提取方法的工业推广。 现状： 酶技术应用于中草药有效成分的分离提取取得了很多成果，现已应用于中药提取，但还未推广。 酶解法操作简便易行, 条件温和, 酶解法可应用到工业，降低工业生产成本。 用纤维素酶辅助提取补骨脂素和用木瓜蛋白酶辅助提取已有报道，但用复合酶酶解提取目前未有报道。  2、复合酶解法与传统其他方法相比，可大幅度提高提取率； 3、酶解法操作简便易行,可降低生产成本，为工业广泛应用提供科学基础。 意义： 1、补骨脂素是补骨脂中的主要药效成分 拟解决问题： 1、确定复合酶的组成及工艺条件 2、比较复合酶辅助提取与传统方法直接提取的效果比较 内容： 一、确定复合酶的种类组成： ①各种酶分别进行单一酶辅助提取 ②TLC法比较酶解前后有效成分有无改变 ③以补骨脂素提取量为指标筛选酶解效果最好的三种酶（若有蛋白酶，需检测蛋白酶对其他酶有无影响） 二、正交试验确定复合酶的工艺条件 三、在酶辅助下以不同提取方法提取，与传统直接提取方法比较 四、建立HPLC法测定补骨脂素含量的方法 以不同的提取方法提取 补骨脂粉碎过筛取样 不同种类的酶预处理 超声提取 超声提取 TLC法比较加酶与未加酶有效成分是否改变 HPLC法分别测定补骨脂素含 量 确定复合酶种类 正交试验确定复合酶酶解条件 优化酶解工艺下以不同提取方法提取 HPLC法测定补骨脂素含量 分别计算补骨脂素提取率 比较提取率得出结论 流程 方法：一、确定复合酶的种类组成： ⑴分别做各种酶酶用量的单因素试验，根据补骨脂素提取量确定各种酶最佳的酶用量范围； ⑵综合比较各种酶的提取效率，选择提取效果最好的三种酶作为复合酶组成。 二、正交试验设计 以上述酶添加量结果为参考，设置酶添加量的水平,设计六因素三水平试验。（若确定的酶中有蛋白酶，且蛋白酶对其它酶有影响，则先加前两种，后加蛋白酶） 因素 水平 A: 温度 （℃） B :时间(min) C : pH D :酶1 E :酶2 F: 酶3 1 2 3 （ 注：以上六因素水平由具体情况而定。） 三. 超声提取提取条件：用8倍量的50%乙醇，提取补骨脂3次，每次25~30min 四．薄层层析条件：. 硅胶板:硅胶G 展开剂:苯 紫外灯光下检视 五、建立HPLC法测定补骨脂素含量的方法 1.高效液相测补骨脂素含量 色谱条件：填充剂用十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：甲醇—水（55 :45） 流速：0.8ml/min 检测波长：245nm 柱温：25℃ 2.HPLC测定方法学考察 线性相关性实验、重现性实验、加样回收实验等。 预期结果： 1 、酶解前后有效成分未改变，用优化复合酶辅助提取后，补骨脂素提取率提高。 2、酶解后再用乙醇回流、浸提所需的乙醇浓度、提取时间比未加酶时可能都会减少。有广泛应用于工业的可能。 可行性探究实验材料可准备齐全,仪器与场所本校皆可提供,本课题由专业老师指导 分年度研究内容： 第一阶段（2009年5月~8月）： 单一酶实验确定复合酶的组成 第二阶段（2009年8月~12月）： 复合酶的反应条件的确定及酶解辅助提 取与直接提取的效果比较 第三阶段（2010年1月~3月） 整理数据，撰写论文 经费预算 经费预算、需要的理由，分项列出 仪器租用费 500.00 高效