蛋白质分离、提取.pptVIP

综合性实验蛋白质的分离提取、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western印迹 蛋白质的分离提取 蛋白质分子在水溶液中因其表面带有一定数量的电荷及形成水化膜使其成为稳定的胶体颗粒。在某些物理或化学因素影响下，蛋白质颗粒由于失去电荷和水化膜而沉淀。 中性盐、重金属盐、三氯乙酸和乙醇等都是常用的沉淀蛋白质的试剂。 Ⅰ、蛋白质的盐析 大量中性盐类如硫酸铵(NH4)2SO4、硫酸钠(Na2SO4)和氯化钠(NaCl)等加入到蛋白质溶液后，可引起蛋白质颗粒因失去水化膜和电荷而沉淀。 各种蛋白质分子的颗粒大小和电荷数量不同，用不同浓度中性盐可使各种蛋白质分段沉淀。例如血清中的球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中沉淀。当硫酸铵浓度达到饱和时血清中的白蛋白便沉淀下来。盐析沉淀蛋白质时能保持蛋白质不变性，加水稀释降低盐浓度，能使沉淀的蛋白质重新溶解，并保持其生物活性。因此，利用盐析法可达到分离提纯蛋白质的目的。 Ⅱ、重金属盐和三氯乙酸沉淀蛋白质 重金属离子如Pb2+、Cu2+、Hg2+、Ag+等可与蛋白质分子上的羧基结合生成不溶性蛋白质金属盐而沉淀。三氯乙酸属生物碱试剂，能与蛋白质分子上的氨基结合而沉淀。它们均可引起蛋白质分子的变性和失去生物学活性。 Ⅲ、乙醇沉淀蛋白质 某些可与水混合的有机溶剂如甲醇、乙醇和丙酮等，能破坏蛋白质的水化膜，降低其在溶液中的稳定性。当加入少量中性盐如NaCl等或溶液pH接