第五章 菌种的扩大培养.pptVIP

第二节 菌种培养条件 一、培养条件 二、菌种扩大培养 1、温度 2、pH值 3、氧 4、通气搅拌 5、种龄 6、接种量 1．温度 通常在生物学范围内每升高10℃，生长速度就加快一倍，所以温度直接影响酶反应，对于微生物来说，温度直接影响其生长和合成酶。 机体的重要组成如蛋白质、核酸等都对温度较敏感，随着温度的增高有可能遭受不可逆的破坏。 微生物可生长的温度范围较广，总体说在-10—95℃。 温度 任何微生物的生长都需要有最适的生长温度，在此温度范围内微生物生长繁殖最快。 如果所培养的微生物能承受稍高一些的温度进行生长和繁殖，这对生产有很大的好处，即可减少污染杂菌的机会和夏季培养所需降温的辅助设备，因此培养耐高温的菌种有一定的生产现实意义。 2．pH值 培养基中的pH值与微生物生命活动有着密切关系，各种微生物有其可以生长的和最适生长的pH范围。 微生物通过其活动也能改变环境的pH值。 发酵过程中，控制发酵液的pH值是控制生产的指标之一，pH值过高、过低都会影响微生物的生长繁殖以及代谢产物的积累。 控制pH值不但可以保证微生物良好的生长，而且可以防止杂菌的污染。 培养基pH在发酵过程中能被菌体代谢所改变。若阴离子(如醋酸根、磷酸根)被吸收或氮源被利用后产生NH3 ，则pH上升；阳离子(如NH4、K+ )被吸收或有机酸的积累，使pH下降。 一般来说，高碳源培养基倾向于向酸性pH转移，高氮源培养基倾向于向碱性pH转移，这都跟碳氮比直接有关。 3．氧 微生物对氧的需要不同，是由于依赖获得能量的代谢方面的差异。好气性菌主要是有氧呼吸或氧化代谢，厌气菌为厌气发酵(分子间呼吸)，兼性厌气菌则两者兼而有之。 不同微生物或同一微生物的不同生长阶段对通风量的要求也不相同。 4.通风和搅拌 通气可以供给大量的氧。 通气量与菌种、培养基性质、培养阶段有关。 通气量的多少，最好按氧溶解的多少来决定。只有氧溶解的速度大于菌体的吸氧量时，菌体才能正常地生长和合成酶。因此随着菌体繁殖，呼吸增强，必须按菌体的吸氧量加大通气量，以增加溶解氧的量。 搅拌则能使新鲜氧气更好地与培养液混合，保证氧的最大限度溶解，并且搅拌有利于热交换，使培养液的温度一致，还有利于营养物质和代谢物的分散。此外，挡板则有助于搅拌，使其效果更好。 一般来说，若培养罐深，搅拌转速大，通气管开孔小或多，气泡在培养液内停留时间就长，氧的溶解速度就大，而且在这些因素确定下，培养基的粘度越小，氧的溶解速度也越大。 搅拌可以提高通气效果，但是过度地剧烈搅拌会导致培养液大量涌泡，容易增加杂菌污染的机会，液膜表层的酶容易氧化变性，微生物细胞也不宜剧烈搅拌。 5.种龄与接种量 种子培养期应取菌种的对数生长期为宜，菌种过嫩或过老，不但延长发酵周期，而且会降低产量。 接种量的大小直接影响发酵周期。 大量地接入培养成熟的菌种的优点： 1.可以缩短生长过程的延缓期，因而缩短了发酵周期，提高了设备利用率 2.节约了发酵培养的动力消耗 3.并有利于减少染菌机会 一般都将菌种扩大培养，进行两级发酵或三级发酵。 接种量和培养物的生长过程的延缓期长短呈反比。 接种量过多也无必要。因培养种子费时，而且过多地移入代谢废物，反而会影响正常发酵。 二、菌种扩大培养 (二)、主要培养方法及特点 1．种子扩大培养阶段 (1)液体培养法 包括液体试管、三角瓶摇床振荡或回旋式培养。摇瓶通气量大小与摇瓶机型式、转数、振程(或偏心距)、三角瓶容量、装料量有关。 (2)表面培养法 包括茄子瓶、克氏瓶或瓷盘培养。 (3)固体培养法 包括三角瓶、蘑菇瓶、克氏瓶、培养皿等麸皮培养。 2．大规模生产阶段 (1)表面培养 (2)固体培养 (3)液体深层培养 (4)载体培养 (1)表面培养 表面培养是一种好氧静置培养方法 针对容器内培养基物态又分为液态表面培养和固态表面培养。 相对于容器内培养基体积而言，表面积越大，越易促进氧气由气液(气固界面向培养基内传递，包括茄子瓶、克氏瓶或瓷盘培养。 这种培养方法菌的生长速度与培养基深度有关，单位体积的表面积越大，生长速度也越快。 氧的供给常成为发酵的限速因素，所以发酵周期长，占地面积大。 优点是不需要深层培养时的搅拌和通气，节省动力。如醋酸、柠檬酸发酵和曲盘制曲。 (2)固体培养 固体培养又分为浅盘固体培养和深层固体培养，统称曲法培养。它起源于我国酿造生产特有的传统制曲技术。其最大特点是固体曲的酶活力高。 固体培养具有以下优点