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第三章 DNA 复制 1. 细菌DNA复制 起始 延伸 终止 2. 真核生物DNA复制 起始 延伸 端粒复制 3. 细胞周期 细胞周期及各期划分 细胞周期调控 DNA复制的基本特点： 复制是生物体基本的生命活动之一。 DNA 复制是以亲代模板合成子代DNA 的过程： dATP, dTTP 1 dsDNA ──→ 2 ssDNA ──────→ 2 dsDNA dGTP, dCTP DNA复制是半保留复制 半保留复制证明：放射性同位素15N标记实验。 细菌培养于15N硝酸盐培养基中； 14N硝酸盐培养基中继代培养； 第1、2复制周期结束提取DNA； 密度梯度离心观察DNA带分布。 复制子：DNA分子上作为复制单位的区域(片段)。复制 子包括一个复制起点和若干个复制终点；原核DNA 通常只有一个DNA分子，含一个复制子；真核DNA通 常有多个DNA分子，每个DNA分子均含多个复制子. DNA方向：新链由5`－端向3`－端延伸，所以两条DNA 新链中，一条是连续合成的，一条是分段 落合成的。 RNA引物：在DNA合成前，先由RNA聚合酶催化合成 一段RNA引物，然后DNA聚合酶再接着进 行DNA合成，再由DNA连接酶将不连续DNA 片段连接成完整的DNA链。 DNA合成的要素：模板DNA，dNTPs，RNA聚合酶， DNA聚合酶，DNA连接酶。 1 细菌DNA复制 1.1 起始： 拓扑异构酶的作用下，DNA超螺解开为双螺旋； 复制起点与起始蛋白复合体(DnaA-ATP)结合，附着于细胞膜上； DNA 双螺旋局部打开(三个13 bp富含AT序列)； DNA解旋酶(DnaB) 结合到起始复合体上继续打开双螺旋，单链结合蛋白(Ssb)稳定分开的单链； 引物酶(一种RNA聚合酶)附着于复合体上催化合成引物RNA； DNA逥旋酶缓解因双螺旋解开而产生的正超螺旋扭力。 1.2 延伸： DNA pol III α亚基催化从 5’-端向 3`端接着引物合成DNA, 先导链连续合成，后随链分段(冈崎片段)合成； DnaB不断打开双螺旋，先导链不断延伸DNA，引物酶在后随链上不断地以一定间隔合成引物并接着由DNA聚合酶合成冈崎片段(1000-2000nt)； DNA pol I 降解引物并填充DNA，DNA ligase 将冈崎片段连接成长链。 DNA pol I 的5’-3’外切酶活性可除去RNA引物，5’-3’聚合酶活性可填补去引物后的空隙，3’-5’外切酶活性可校正错误渗入的核苷酸。 DNA 速率约为每秒 900 bp。 半不连续复制(延伸) 1.3 终止： 细菌 DNA 复制子有一个起点, (ori C) 和两个复制叉，复制 终点相对于复制起点(180o)。 复制叉移至复制终点，tus gene 产物结合于终点抑制DnaB 解旋酶并阻止复制叉的位移； 复制完成, 拓扑异构酶IV分离两个交联的子代DNA环，两个子DNA分子分开。 2 真核生物DNA复制 2.1 起始 真核生物DNA复制发生于S期，成簇的20-50 复制子同时起始； 一般情况下，常染色质的复制快于异染色质，中心粒DNA和端粒DNA最后复制； 复制子锚定在染色质支架蛋白上，每复制子在起点处有11 bp的一致序列与识别蛋白复合体(ORC)结合，CDKs (cyclin-dependent kinase)活化ORC打开 DNA双螺旋； 许可因子确保每个复制起点在一个细胞周期中只使用一次。 multiple origins 2.2 延伸 真核D