硫酸铜对斑马鱼胚胎发育的影响.docVIP

中 国 海 洋 大 学 实 验 报 告 年 月 日 姓名： 专业年级： 同组者： 课程：发育生物学实验 题目： 硫酸铜对斑马鱼胚胎发育的影响 一．【实验目的】 1、锻炼独立开展科学实验、分析和解决实际问题的能力； 2、加深环境对动物受精及早期发育影响的理解 二.【实验原理】 重金属污染是近年渔业环境污染的公害之一。随着工农业的发展，浓度严重超标的一些重金属离子被排入水体而造成污染，对鱼类有毒害作用。目前水体中的重金属主要有Cd、Cu、Pb、Zn等。其中Cu离子就具有较强的毒性，可以和蛋白质中游离的羧基形成不溶性的盐使蛋白质变性性成熟周期短药物对其体内器官的影响雌性斑马鱼可产卵200枚，胚胎在24小时内就可发育成形，繁殖水温24时，受精卵经2~3天孵出仔鱼；水温28时，受精卵经36小时孵出仔鱼这使得生物学家可以在同一代鱼身上进行不同的实验，进而研究病理演化过程并找到病因。由于斑马鱼基因与人类基因的相似度达到87%，这意味着在其身上做药物实验所得到的结果在多数情况下也适用于人体，因此它受到生物学家的重视 对照组 1 2 3 4 5 Cu2+浓度(mg/L) 0 0.001 0.01 0.1 1.0 2.0 2）胚胎的挑选与培养管理 在显微镜下选取正常发育至囊胚时期（产卵2-3 h）的斑马鱼胚胎，按2-3个/ml的密度移入24孔细胞培养板的各培养孔内，每个培养板的第一列4个孔加入2 ml 标准稀释水作为空白对照，其余20个孔加入2 ml 重金属溶液，加盖以免溶液蒸发，置于25 ℃ 恒温培养箱中培养。 每12 h 换水一次，每次所换水中CuSO4溶液与最初浓度保持一致，每次换水量为原水量的1/2。 3、观察、记录 每隔12 h在显微镜下观察各组胚胎整体发育情况并拍照片记录。鱼卵孵化后统计胚胎孵化率和仔鱼畸形率。如果胚胎出现S型弯曲，萎缩，缺少头部，未形成体节以及出现增生或者分叉，心跳缓慢，心包囊肿等则认为胚胎发育畸形，对于初孵仔鱼，若出现活力弱，运动失调，鳍褶出现残缺，身体成深褐色，并在12 h 内死亡，则认为胚胎受到重金属的危害。用观察心跳、身体运动及外物刺激有无反应来判断胚胎和仔鱼的死亡,死亡的胚胎和仔鱼立即从培养溶液中去除。 4、计算及数据分析 死亡率（%）=死亡的胚胎数/受精卵总数×100% 各实验组相关指标以3个平行组的平均数来代表，使用SPSS 13.0软件进行实验组间以及与对照组间的差异性分析，以P0.05表示有显著差异，P0.01表示有极显著差异。 四.【实验结果】 Cu2+ 浓度（mg/L） 0 0.001 0.01 0.1 1.0 2.0 24 h 死亡率（%） 87.5 68.75 68.75 43.75 62.5 81.25 36 h 死亡率（%） 87.5 75 75 50 62.5 81.25 58 h 死亡率（%） 87.5 87.5 87.5 62.5 75 87.5 24 h 发育情况： 对照组 第1组 第2组 第3组 第4组 第5组 36 h 发育情况： 对照组 第1组 第2组 第3组 第4组 第5组 58 h发育情况： 对照组 第1组 第2组 第3组 第4组 第5组 五.【讨论】 从上述实验结果来看，对照组和第5组死亡率最高，其中对照组胚胎的死亡可能是因为水质败坏，在显微镜下可明显观察到许多原生动物游动，并噬咬胚胎，同时还会消耗水中氧气，造成水体缺氧，胚胎发育异常。第五组死亡率最高，这在预料之中，这一组CuSO4浓度最高，对胚胎的正常发育产生严重影响，比如胚胎死亡，发育畸形，仔鱼孵出后反应迟钝，动作缓慢，很快死亡。 从实验数据来看，刚开始随着Cu2+ 浓度的升高，胚胎死亡率出现降低的趋势，这可能是因为水中原生动物以及致病微生物的生长因此受到抑制，对胚胎的发育影响作用