第九章 酶反应器和酶传感器.docVIP

第九章 酶反应器和酶传感器 第一节 酶反应器 一、生物反应器概述 利用生物催化剂将原料转化成有用物质的生产过程，称为生物反应过程。 通常，生物反应过程包括四个组成部分： （1）原材料的预处理。 （2）生物催化剂的制备。 （3）生物反应器的选择及反应条件的调控。 （4）产物的分离提纯。 在生物反应过程中，生物反应器（Biological Reactor）是用于完成生物化学反应（酶促反应）的核心装置。 利用生物工程技术进行生产的过程统称为生物反应过程，在这一过程中，生物反应器起着极其重要的作用，它是实现生物技术产品产业化的关键设备，是连接原料和产物的桥梁。 生物反应器设计的主要目标是,使产品的质量提高,生产成本降低。为了达到上述标准，对生物反应器提出下列要求： (1).所用生物催化剂应具有较高的比活和酶浓度。 (2).能用电脑自动检测和调控，从而获得最佳的反应条件。 (3).应具有良好的传质和混合性能。 (4).应具有最佳的无菌条件。 二、固定化酶反应器的类型及特点 固定化酶反应器和固定化细胞反应器，二者的构造、性能基本一致。 固定化酶反应器有下列各种类型： 1.间歇式酶反应器 特点是底物与酶一次性投入反应器内，产物一次性取出；酶回收后转入下一批反应。 2.连续搅拌釜式反应器 特点是达到平衡后以恒定的流速连续流入底物溶液，同时，以相同流速输出反应液（含产物）。 3.填充床反应器 将固定化酶填充于反应器内，制成稳定的柱床，然后，通入底物溶液，在一定的条件下实现酶催化反应，以一定的流速，收集输出的转化液（含产物）。 4.流化床反应器 特点是底物溶液以足够大的流速，从反应器的底部向上通过固定化柱床时，便能使固定化酶颗粒始终处于流化状态。 5.连续搅拌罐——超滤膜反应器 特点是在连续搅拌釜式反应器出口处设置一个超滤器。 6.其他类型反应器 三、对固定化酶反应器的选择 影响酶反应器选择的因素很多，但一般可以从以下几个方面考虑： 1.固定化酶的形状 2.底物的物理性质 3.酶反应动力学特征 4.固定化酶稳定性 5.操作要求及反应器费用 四、固定化酶反应器的操作 １.操作中存在的问题 搅拌的问题；使用高浓度的酶；游离酶的处理 ２.酶反应器生产能力下降的原因及对策 在酶反应器操作过程中，其生产能力是逐渐下降的。其原因是多方面的。但是，主要原因是固定化酶活性的下降或损失。造成固定化酶活性的损失可能有下列原因： （1）酶本身的失活； （2）酶从载体上脱落； （3）载体的破碎或溶解。 常用的对策： (1)为了防止变性，操作温度不宜过高，搅拌速度不宜过快； (2)为了防止中毒，要求所用试剂和水不含毒物； (3)为了防止微生物污染，可以提高操作温度，并使反应液pH的尽量偏离中性。 第二节 酶传感器 一、生物传感器概述 生物传感器是一种分离测试装置，用于测定混合物中某中物质的浓度。它具有专一、快速、简便、准确的优点。 生物传感器由感受器和换能器两部分组成。感受器又称为分子识别元件，是由生物活性物质与固相载体结合而成。换能器能将化学信号或物理信号转变为电信号。 根据生物活性物质的不同，可以将生物传感器分成下列几种类型： 1.酶传感器　　其感受器是固定化酶 2.微生物传感器　　其感受器是固定化微生物细胞 3.免疫传感器　　其感受器是固定化抗原或固定化抗体 4.组织传感器　　其感受器是固定化动物或植物的组织切片 5.亚细胞传感器　　其感受器是固定化细胞器 二、酶传感器的结构与工作原理 1.酶传感器　　以固定化酶作为感受器，以基础电极作为换能器的生物传感器。 根据感受器与基础电极结合方式的不同，将酶传感器分为电极密接型和液流系统型。 2.酶传感器的工作原理 把酶电极插入待测溶液中，此时，固定化酶专一地催化混合物中目的物质发生化学反应，产生某种离子或气体等电极活性物质（生化信号），再由基础电极对其作出选择性响应，将生化信号转变成电信号，然后，经过放大、数据处理，由记录仪给出混合物溶液中目的物质的浓度数据。 三、酶传感器的制备及性能 （一）酶传感器的制备 1.制备酶传感器的一般步骤 (1)选择酶，选择能专一性催化目的物质发生化学反应的酶。 (2)酶与固相载体结合成固定化酶。 (3)选择基础电极。 (4)将固定化酶与电极连接。 2.几种常见酶传感器的制备 (1)透析膜包扎法 (2)聚丙烯酰胺固定化酶涂层法 (3)交联酶涂层法 （二）酶传感器的性能 1.稳定性 酶电极的稳定性可以用使用时间和使用次数来表示。为了得到准确的测定数据，每次使用时都要重新做校正曲线，如果校正曲线的斜率保持不变，则酶电极可以使用。 2.响应特性 从酶电极插入被测试样到获得稳定测定值的电信号所需要的时间，称为响应时间。 3.恢复时间 酶电极在完成第一个样品测定之后，不能立即作第二个样品的测定，需