【生物】人教版选修1讲义：专题5　DNA和蛋白质技术 第14课时 Word版含答案.docxVIP

第14课时　多聚酶链式反应扩增DNA片段[学习导航]　1.阅读教材P58“(一)”，分析PCR技术与DNA复制的区别和联系，掌握PCR技术原理。2.阅读教材P59“(二)”，分析PCR的过程，掌握PCR循环的原理。3.阅读教材P62“实验操作及操作提示”，掌握PCR技术的实验操作过程及注意事项。4.阅读教材P62～63“结果分析与评价”，掌握DNA含量测定的方法。[重难点击]　1.了解PCR技术的基本操作。2.理解PCR的原理。3.讨论PCR的应用。一、PCR原理与反应过程1.PCR原理与条件(1)PCR的概念PCR即多聚酶链式反应，是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。它能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。(2)细胞内DNA复制的基本条件参与的组分在DNA复制中的作用解旋酶打开DNA双链DNA母链提供DNA复制的模板4种脱氧核苷酸合成子链的原料DNA聚合酶催化合成DNA子链引物使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸(3)PCR原理①DNA变性：在80～100 ℃的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。②DNA复性：当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链，这个过程称为复性。③子链的合成：DNA聚合酶从引物的3′端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。(4)PCR条件①原料：4种脱氧核苷酸。②模板：加热变性解旋后的两条DNA母链。③酶：耐热的DNA聚合酶。④引物：使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸。⑤其他条件：需要稳定的缓冲溶液和能自动调节温度的温控设备等。2.PCR过程与结果(1)PCR过程过程温度主要变化变性90 ℃以上双链DNA解聚为单链复性50 ℃左右两种引物通过碱基互补配对分别与两条单链DNA结合延伸72 ℃左右溶液中的四种脱氧核苷酸(A，T，G，C)在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链(2)PCR的结果DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。1.PCR原理PCR反应与体内DNA复制的引物在化学本质上是否相同？请分析原因。答案　不相同。体内DNA复制所需引物为RNA聚合酶合成的一小段RNA，但PCR反应时所用引物一般是人工加入的一小段单链DNA。2.PCR反应过程(1)PCR反应中需要解旋酶和DNA聚合酶吗？若需要，则与细胞内DNA复制有何区别？答案　PCR反应不需要解旋酶，但需要DNA聚合酶。由于PCR反应中需要高温使DNA解旋，因此PCR所需的DNA聚合酶能耐高温。(2)PCR的每次循环中应如何控制温度？请分析原因。答案　每次循环中先高温解旋，再低温使引物与模板结合，最后适当升温有利于Taq DNA聚合酶发挥作用。(3)结合下图分析PCR过程中DNA复制的方向是怎样的？答案　DNA的羟基(—OH)末端为3′端；磷酸基团的末端为5′端。当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。归纳总结　PCR扩增与DNA复制的异同项目DNA复制PCR扩增不同点时期有丝分裂间期或减Ⅰ前的间期任何时期场所活细胞内细胞外酶解旋酶、DNA聚合酶耐高温的Taq DNA聚合酶引物有转录，产生RNA作引物，无需人工加入无转录，无引物产生，需人工加入两种DNA引物特点边解旋边复制先全部解旋后开始复制缓冲液不需缓冲液配制缓冲液代替细胞核液设备无控制温度变化的温控设备相同点原理严格遵循碱基互补配对原则引物都需要分别与两条模板链相结合的两种引物模板DNA的两条链为模板特点半保留复制原料游离的四种脱氧核苷酸1.下列关于DNA复制和PCR技术的描述中，正确的是(　)A.DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从5′端延伸DNA链B.DNA复制不需要引物C.引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合D.PCR扩增的对象是氨基酸序列答案　C解析　DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，故DNA复制需要引物。DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链，而不能从5′端延伸DNA链。引物通过碱基互补配对原则与DNA母链相结合。PCR扩增的对象是DNA，不是氨基酸序列。2.PCR技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低难以对样品进行研究的问题，而被广泛应用，与细胞内的DNA复制相比，PCR可以快速扩增所需的DNA片段，请分析回答下列有关问题：(1)体内DNA复制过程中用解旋酶打开双链DNA，而PCR技术中的解旋原理是 。(2)此过程需要一种Taq DNA聚合酶。该酶是从 中分离的。(3)与普通DNA聚合酶相比，Taq DNA聚合酶具有的特性是 。(4)与体内DNA复制相比较，PCR反应要在