健脾化湿颗粒对腹泻型肠易激综合征大鼠结肠5-ht,crf及其受体的影响-effects of jianpi huashi granule on colon 5 - ht, crf and their receptors in diarrhea-predominant irritable bowel syndrome rats.docxVIP

健脾化湿颗粒对腹泻型肠易激综合征大鼠结肠5-HT，CRF及其受体的影响摘要肠易激综合征（Irritablebowelsyndrome,IBS）是一种常见的胃肠道功能紊乱性疾病，常常表现为腹痛、腹胀、排便习惯和大便性状异常。根据临床表现形式，IBS可以分为腹泻型、便秘型、腹泻-便秘交替型[1]，以腹泻型较为常见。腹泻型肠易激综合征（Diarrhea-prominantirritablebowelsyndrome,D-IBS）患者以腹痛、腹泻为主，并伴有心烦、焦虑、抑郁等神经功能失调症状。迄今为止其病因及发病机制与多种因素有关，尚无法用单一的生理病理机制解释复杂的IBS症状。近年来，相关神经胃肠学研究发现D-IBS与心理应激引起的脑-肠轴功能紊乱有关[2]，并认为脑-肠轴异常可能是导致D-IBS患者对各种应激反应增强和内脏敏感性增加的主要因素。然而，脑-肠轴功能的调节又依赖于各种脑肠肽及其受体的表达，其主要兴奋递质有组胺、5-羟色胺（5-HT）、P物质（SP）、降钙素基因相关肽（CGRP）、促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）等；抑制性递质有胆囊收缩素（CCK）、去甲肾上腺素（NE）、血管活性肽（VIP）等，本实验拟从5-HT、CRF进行研究，其中5-HT是一种单胺类递质，广泛存在于CNS和肠道中，在脑-肠传导中起着及其重要的作用；CRF是一种重要的神经内分泌肽，是参与应激反应的一个重要因子，主要分布在中枢神经系统和外周组织，如肾上腺、胃肠道、脾等。目前西医以对症治疗为主，包括泻药、止泻药、胃肠解痉药、肠道动力感觉调节药等。在短期内这些药物对症状的缓解有一定的疗效，但远期治疗效果不太理想，停药后较易复发；亦或是有较大的毒副作用。如于2002年正式被美国FDA批准临床应用于改善胃肠道症状的药物替加色罗，因其心脏毒性，现已退出市场等等。中医药在缓解症状和改善患者生活质量方面较西医治疗有较大优势[3]。健脾化湿颗粒源于临床验方，其疗效确切。该课题组采用灌服番泻叶并施加束缚应激[4]的方法建立腹泻型肠易激综合征大鼠模型。前期实验显示，健脾化湿颗粒可以显著改善和缓解腹泻型肠易激综合征大鼠的内脏高敏感和胃肠动力异常，并从调节中枢神1经系统（脑、脊髓）中5-HT、CRF、CRF1R的变化来研究健脾化湿颗粒治疗D-IBS大鼠的作用机制。本实验从外周（结肠）系统中脑肠肽（5-HT、CRF）及其受体（5-HT3R、5-HT4R、CRF1R）进行研究，进一步为健脾化湿颗粒治疗腹泻性肠易激综合征提供实验数据，丰富中医药理论知识。目的：本实验通过观察健脾化湿颗粒对腹泻型肠易激综合征大鼠结肠内CRF,CRF1R,5-HT,5-HT3R,5-HT4R的影响，探讨健脾化湿颗粒改善D-IBS模型大鼠结肠运动和内脏敏感性的外周作用机制。方法：选用7周龄SPF清洁级SD大鼠72只，随机分成六组，每组12只，分别为正常组（N）、模型组（MO）、阳性对照组（PC）、健脾化湿颗粒低剂量组（L）、健脾化湿颗粒中剂量组（M）、健脾化湿颗粒高剂量组（H）。实验前禁食不禁水，除正常组其余各组大鼠前14天分别予以番泻叶煎剂（0.3g·mL-1生药）灌胃。后14天在灌服完番泻叶煎剂后用透明胶带束缚大鼠前上肢，胸部及肩部持续1h。束缚1h后模型组予以生理盐水灌胃；健脾化湿颗粒（低、中、高）剂量组予以健脾化湿颗粒（0.25g·mL-1、0.5g·mL-1、1g·mL-1）剂量灌胃；阳性对照组予以得舒特（3mg·mL-1）灌胃；正常组大鼠前14天、后14天均予以生理盐水灌胃，各溶液灌胃量均按照10mL·kg-1。药物干预14天后，腹腔注射10%水合氯醛麻醉处死大鼠，迅速取一段远端结肠组织，用生理盐水清洗干净后，一部分置于-80℃冰箱里冷冻保存；一部分置于4%多聚甲醛中固定用于检测待测指标。采用酶联免疫法（ELISA）检测大鼠结肠中五羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）、促肾上腺皮质激素释放因子（Corticotropinreleasingfactor,CRF）的含量；免疫组化法（Immunohistochemistry,ICH）检测结肠粘膜中CRF，粘膜下层促肾上腺皮质激素释放因子1受体（Corticotropinreleasingfactorreceptor1,CRF1R）、5-羟色胺3受体（5-HT3R）、5-羟色胺4受体（5-HT4R）的阳性表达；反转录-聚合酶链反应（reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR）法分别检测CRF、CRF1R、5-HT3R、5-HT4RmRNA的表达。结果：1健脾化湿颗粒对D-IBS大鼠结肠5-HT及其受体的影响21.1健脾化湿颗粒对D-IBS大鼠结肠中5-HT含量的影响与正