京尼平苷对棕榈酸诱导ins1细胞凋亡的保护及机制研究-protective effect of geniposide on palmitic acid-induced apoptosis of in s1 cells and its mechanism.docxVIP

重庆大学硕士学位论文 中文摘要 I 摘 要 2型糖尿病病人体内持续高糖、高脂环境会产生氧化应激，导致β细胞损伤， 最终诱导β细胞凋亡。因此，改善β细胞功能并提高β细胞存活正在成为治疗2型糖 尿病的重要策略。内源性激素胰高血糖素样肽1(glucagon-like peptide 1,GLP-1)，通 过激活其受体，具有刺激葡萄糖依赖的胰岛素分泌、促进胰岛素的生物合成，诱 导胰腺导管细胞分化成内分泌细胞和抗凋亡的作用。我们前期研究证实，京尼平 苷是一种新的GLP-1受体激动剂，能够诱导和增强葡萄糖刺激的胰腺β细胞分泌胰 岛素，并且降低2型糖尿病的血糖，表明京尼平苷在治疗2型糖尿病方面有一定的 应用开发价值。本文主要考察京尼平苷对棕榈酸 (palimitate, PA) 诱导的INS-1细胞 (一种胰腺β细胞系)损伤的保护作用及相关作用机制。 MTT实验结果表明，0.4 mM PA/0.5%BSA作用INS-1细胞7小时后，细胞活力 下降，京尼平苷可以显著抑???PA诱导的INS-1细胞氧化损伤。Western blot实验结果 证实，在PA短时间(1小时)处理的INS-1细胞中，京尼平苷可以明显提高PKB磷酸化 和FoxO1表达水平上调 (P0.05)，同时抑制JNK的磷酸化水平 (P0.05)。在京尼平 苷存在的条件下，PA处理细胞7小时后，京尼平苷能继续上调FoxO1磷酸化，降低 JNK的磷酸化水平 (P0.01)，并上调PDX-1蛋白的表达 (P0.05)，这与FoxO1磷酸 化上调以及JNK下降相一致。说明京尼平苷可能通过调节PKB和FoxO1等激酶途径 上调PDX-1表达，提高细胞活力。 为了进一步考察PA长时间处理的细胞中，京尼平苷对细胞活力的影响和相关 激酶的调节作用，我们将PA处理的时间延长到18小时，结果发现，0.4 mM PA作用 细胞18小时后，大部分细胞漂浮，因此我们将PA的剂量减少到0.2 mM。流式细胞 仪分析结果表明，0.2 mM PA/0.5% BSA处理INS-1细胞18小时，也可诱导少量细胞 凋亡，京尼平苷也能明显抑制PA诱导的细胞凋亡 (P0.05)。但是，在0.2 mM PA 长 时间处理的INS-1细胞中，Western blot实验结果表明，PA长时间作用INS-1细胞后， 京尼平苷除有上调磷酸化PKB的作用外 (P0.05)，对JNK磷酸化，PDX-1和Bcl-2 等蛋白的表达均无明显作用。 为研究京尼平苷在PA长时间作用时其保护作用下降的原因，我们测定了长时 间PA作用INS-1细胞时GLP-1R拮抗剂Ex-3的效应以及GLP-1R的表达。同时， GLP-1R拮抗剂Ex-3也能明显抑制京尼平苷对PA诱导的INS-1细胞损伤的保护作 用。我们进一步研究证实，PA长时间作用INS-1细胞之后，INS-1细胞中GLP-1受体 II 表达水平明显下调，上述研究结果表明，京尼平苷对PA诱导的INS-1细胞损伤的保 护作用与其激活GLP-1R有重要联系。 关键词：2型糖尿病，细胞凋亡，棕榈酸，京尼平苷，胰腺-十二指肠同源框1 重庆大学硕士学位论文 英文摘要  PAGE 6 ABSTRACT Chronic high level of free fatty acids and glucose in type 2 diabetes increases the oxidative stress, leading to detrimental effect on β cell function and eventually inducing β cell apoptosis. Therefore, it is an important therapeutic strategy for type 2 diabetes to improve β cell function and its survival. Endogenous incretin hormones glucagon-like peptide-1(GLP-1), through activation on its receptor, has various effects on β cell including enhancing glucose-stimulated insulin secretion, differentiation of ductular cell in pancreas to endocrine cells and anti-apoptosis. In our previous work, we reported that geniposide, a novel agonist for GLP-1 recep