加味四逆散对肝纤维化模型大鼠血清astalt及肝病理变化的影响-effects of modified sini powder on the changes of serum astalt and hepatology in rats with hepatic fibrosis.docxVIP

参考文献.................................................................................................................24附录1.....................................................................................................................29附图1各组大鼠肝组织病理切片（HE染色40×200）29附图2各组大鼠肝组织uPA免疫组化图片（40×200）31附图3各组大鼠肝组织PAI-1免疫组化图片（×200）33附录2.....................................................................................................................35附录3.....................................................................................................................40摘要一目的研究加味四逆散治疗肝纤维化模型大鼠的疗效，探讨加味四逆散治疗肝纤维化的作用机制，为加味四逆散治疗肝纤维化提供实验依据。观察加味四逆散对肝纤维化模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（alanineaminot-ransferase,ALT）和天门冬氨酸氨基转氨酶（asparataeamintransferease,AST）的影响，以研究加味四逆散治疗肝纤维化的肝脏酶学变化规律，为加味四逆散治疗肝纤维化提供肝脏酶学变化依据。观察加味四逆散对肝纤维化大鼠模型肝组织尿激酶型纤溶酶原激活物（urkin-ase-typeplasminigenactivator，uPA）和纤溶酶原激活物抑制剂-1（Plasminogenactivatorinhibitor-1，PAI-1）的影响，以研究加味四逆散治疗肝纤维化的纤溶系统机制，为加味四逆散治疗肝纤维化提供病理学依据。观察加味四逆散对肝纤维化模型大鼠肝脏病理变化的影响，以研究加味四逆散治疗肝纤维化的病理学变化，为加味四逆散治疗肝纤维化提供病理学依据。二方法72只SPF级Wistar大鼠，雌雄各半，随机选取12只做空白对照，其余造模分组。按照1:100（v/v）用生理盐水配置二甲基亚硝胺(N-Nitrosodimethylamine,DMN)稀释溶液，以10μl/kg每周前3天对大鼠腹腔注射造模，对照组腹腔注射等量生理盐水，共4周，每周第一天记录大鼠体重变化。造模结束后，用随机数字表法将大鼠分为模型组，鳖甲软肝片组，加味四逆散大剂量组，加味四逆散中剂量组和加味四逆散小剂量组。造模结束，各治疗组以200g大鼠和70kg成人按体表面积折算，灌胃给药，对照组和模型组给予同等生理盐水灌胃，共给药21天。实验结束，麻醉大鼠，摘眼球取血，检测血清学指标。解剖大鼠并肉眼观察腹水量、清晰度、性质及肝脏变化，并取肝脏左前叶，PBS缓冲液固定，苏木精—伊红（hematoxylin-esosinstai-ning,HE）染色及免疫组织化学染色。三结果加味四逆散大、中、小剂量均可降低二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化模型大鼠血清AST和ALT。加味四逆散大剂量组疗效更接近对照组，各治疗组与对照组比较，具有统计学意义（P＜0.05）。加味四逆散大、中、小剂量均可降低二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化模型大鼠肝组织uPA，模型组大鼠uPA和PAI－1显著升高，各治疗组与模型组比较，uPA和PAI－1下降，且有统计学意义（P＜0.05）。HE染色显示，对照组大鼠肝脏结构完整；模型组肝小叶正常结构被破坏，胶原纤维沿界板破坏处向肝小叶内延伸，多数形成假小叶，可见范围不一、程度不等的肝组织坏死区，中央或局部出现炎性细胞浸润；加味四逆散大剂量组肝小叶结构稍有破坏，大部分肝细胞整齐排列，有少量炎症细胞浸润，汇管区有纤维沉积；加味四逆散中剂量组肝细胞整齐排列，炎症细胞浸润明显，标本可见腹水；加味四逆散小剂量组可见纤维沉积于汇管区，炎症细胞浸润相对增多，肝细胞排列紊乱。免疫组织化学法染色显示，对照组肝组织中，未见uPA、PAI-1阳性表达，模型组的肝组织镜检发现，uPA主要分布于假小叶及增生的纤维间隔，PAI-1阳性多见于肝纤维化活跃的汇管区，肝细胞变性坏死处，PAI-1随着肝纤维化的程度增加而阳性表达更明显，uPA则相对不足，加味四逆散大剂量组的肝组织uPA阳性染色较其他组增多。四结论二甲基亚硝胺可以成功诱导大鼠肝纤维化模型，加味四