原位核酸分子杂交在病理学上的应用.pdfVIP

中华病坪学杂志 】99】年第 20卷第 l期 述 评 · 原位核酸分子杂交在病理学上 的应用 中国医学科学院基础医学研究所 丁 濂 核酸分子杂交是近 30年来开展 的技术，现 已成为生物化学和分子生物学常用 的技术之一 双螺旋链 的 DNA在碱性条件、加热 (1O0℃)或加变 陛剂时，其双链 间的氢键解开而成单链，此 称变性。两条碱基互补的单链，在一定离子浓度及逐渐降温下，其互补的碱基可再连接而成双链 结构 的核酸分子 此称复性或退火 这时如果加入 另一条顺序互补 的单链 DNA或 RNA 则可与 原来解开的一条单链互补连接而成异质双链分子 (双链杂交子 double-strandedhybrid)。这一台 成异质双链核酸分子 的过程称为核酸杂交或核酸分子杂交。如果在加入 的单链 DNA或 RNA片 段上加 以标记做为探针 (如同位素、荧光素、酶标、生物素等)则可用此核酸杂交的方法橙 出具有 与探针序列互补的 DNA或 RNA。最初核酸杂交是在 RNA 与 DNA之 间进行 (RNA—DNA杂交 )。因为 RNA是 由一条 0NA转录而来 ，必熟与此 DNA链 的碱基互补，敏可提取纯化此 RNA 加 阻标记制成探针 ，用 阻检 测此互补 的 DNA。阻后这 一技术扩展到 DNA—RNA，DNA—DNA 和 RNA—RNA杂交。棱酸杂交方法最初是在核酸溶液中加入探针溶液进行，此称液相杂交 后将提取的核酸点样或吸印转移 到纤维素膜或 DBM 纸等固体支持物上，再 与溶液 中的探针杂 交 ，如 Southern，Northern核酸杂交等 ，此 称 固相杂交 。在 60年代末开始 了原位核酸杂 交 ，先后在细菌菌落、细胞制片、染色体 制片或组织切片上进行核酸杂交，80年代初还开 始在 电子显微镜的超微结构水平上进行原位核酸杂交 。从广义上说吸印转移到 固体支持物上 的固相核酸杂交具有定位 的作用，所 阻有原位杂交 的意义 。但一般是把原位核酸杂交应用于在细 菌、组织、细胞、或染色体 制片 (包括超微结构)上 核酸杂交是生物化学上研究核酸结构和功能的很有用的一项技术。一般说来原位核酸杂交可 用于检测细胞或组织 内某些正常或异常 DNA、RNA 的定位。也可通过检测 mRNA 阻探索其相 关 DNA 的表达和表达水平 。所 以它能对疾病的病 目、特异性诊断、疾病的分型分期、预后的估 计、功能一形态 的关系 以及细胞 的分化与增殖 的研究提供有价值 的信息。有人把原位核酸杂交称 为杂交细胞化学 (hybridocytochemistry)或杂交组 织化学(hybridohistochemistry)” ，不过很 多人仍沿用原位核酸杂交这一名称 。 国内从 80年代开始不少单位也陆续开展原位核酸杂交工作。短短几年 已做 出了不少成绩。 如直用原位核酸杂交检测肝炎、肝硬变病人 的肝组织中和肝癌 与癌旁肝组 织中乙型肝 炎病毒 DNA，了解其桂 出率，定位和形态特点，并与病人 的病型、病期和 HBsAg、HBcAg等的检 出 率进行对照分析 ；对于流行性 出血 热(EHF)，用 EHF家 鼠型病毒 22M 片断 R cDNA做 为探针，检查 EHF肾综合征 的肾组织和外周血单核细胞中EHFVRNA 的桂出率，并与病期、病 情轻重进行对 照 ” ；对 EB病毒在鼻咽癌，人乳头状瘤病毒 16型在子 宫颈癌，CoxackeB 在心肌病变等的原位核酸杂交研究也开始儆 了一些工作 在肿瘤研究方面，主要是在我国的几种 常见人肿瘤和实验性肿瘤 中，对增生、癌变及癌组织中一些癌基 因(oncogen)和肿瘤标志基因的 表达进行 了研究和分析 ” 。此外在 LAK细胞 的 IL，表达和遗传性疾病 的染色体异常也开始 做 了一些工作 原位棱酸杂交技术可 以用于多方面 。国内 目前在病理学领域 内的应用才开始不久，结合工作 北京 邮政编码 i00005 需要．在病理学上应更多地加 以应用。现在在检测精原体 的工作上，多用于病毒柱酸 的检测 。在 细菌、寄生虫等感染 中如何应用原位杂交技术还有待开发 。如裣查某些细菌的基 因组、隐性质粒 (crypticplasmid) 毒性质粒 (virulaR