林业生物技术 知识课件2.细胞工程原理.pptVIP

中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室 * 1 2 细胞工程概念及内容 细胞全能性 3 培养细胞的营养代谢 4 培养细胞的分化与形态发生 5 培养细胞的遗传变异 细胞工程概念及其 发展的理论依据？ 离体培养细胞 的发育过程？ 思考与讨论 1、细胞工程概念及内容 1.1 细胞工程的概念 20世纪70年代末至80年代初出现了细胞工程这一新型学科。 指在细胞整体水平或细胞器水平上研究开发、利用各类细胞的工程，即人们根据科学设计，改变细胞的遗传基础，通过无菌操作、细胞融合、核质移植、染色体或基因移植以及组织培养和细胞培养等方法，改变细胞内的遗传物质以快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的技术。 细胞工程 动、植物细胞与组织培养 细胞融合 染色体工程 胚胎工程 细胞遗传工程 1.2 细胞工程的研究内容 1、细胞工程概念及内容 1、细胞工程概念及内容 1.3 植物细胞工程 植物细胞工程（plant cell engineering）：是指通过细胞培养、融合等细胞水平的操作，以及包含有多细胞的植物结构离体培养或操作，实现以细胞全能性为基础的改良种质或生产生物产品为目的的技术体系。 2、 细胞全能性 2.3 离体细胞的生命特征 培养细胞具备新陈代谢特性 培养细胞具备应激性 培养细胞可以展现自体复制特性 3、培养细胞的营养代谢 培养基提供的营养物质包括碳水化合物、无机氮和有机氮、其他矿物营养、维生素等。 水 无机营养物（无机盐） 碳源 维生素 生长调节物质 有机附加物 琼脂 活性炭 抗生素 3、培养细胞的营养代谢 3.1 水 培养基中大部分是水 它使细胞质呈胶体状态，活化状态 也是细胞中各种生理、生化反应的介质 起着维持细胞一定渗透压与膨压的作用 并为植物机体提供氢、氧元素 配制培养基时，一般用蒸馏水或去离子水，使水中少含或不含某些离子。 3、培养细胞的营养代谢 3.2 无机营养物 (无机盐) 无机营养物包括大量元素和微量元素。 大量元素是指氮(N)、磷(P)、钾(K)、硫(S)、钙(Ca)、氯(Cl)和镁(Mg)。它们是植物细胞中构成核酸、蛋白质、酶系统、叶绿体以及生物膜所必不可少的元素。 微量元素是指铁(Fe)、硼(B)、锰(Mn)、锌(Zn)、钴(Co)、钼(Mo)、铜(Cu)等，其需要量很少，大多为10-5——10-7mol/L，稍多则产生毒害。 3、培养细胞的营养代谢 3.3 碳源 外植体光合作用的能力低，需要在培养基中添加一些碳水化合物作为生长发育的能源 一般是添加蔗糖、葡萄糖和果糖，其中以蔗糖最常用，效果也最好 糖类在培养基中除了作为碳源和能源外，还具有维持培养基一定渗透压的作用 大多数植物细胞对蔗糖的需求范围是1％-5％(可维持的渗透压范围在-152至-415kPa 蔗糖作为碳源和渗透剂的比例约为3:1-3:2，即约有1/4至2/5的蔗糖用于保持培养基的渗透压 3、培养细胞的营养代谢 3.4 维生素类 维生素类与植物体内各种酶的形成有关 维生素类的种类很多，在植物组织培养中通常以B族维生素为主 使用浓度一般为0.1-1.0mg/L，其中以维生素盐酸硫胺素(Vit.B1)、盐酸吡哆素(Vit.B6)、烟酸（Vit. B3)、Vit.B12、泛酸钙(Vit.B5)、生物素(Vit.H)及维生素C最常用。 肌醇(环己六醇)本身不促进外植体生长，但可能有助于活性物质发挥作用；培养基中的肌醇用量为50-100 mg/L。 3、培养细胞的营养代谢 3.5 氨基酸及有机附加物 培养基中重要的有机氮源 甘氨酸(Gly)、丝氨酸(Ser)、酪氨酸(Tyr)、谷氨酰胺(Gln)、天冬酰胺(Asn)等 甘氨酸能促进离体根的生长，对植物组织培养物的生长也有良好的促进效果 丝氨酸和谷氨酰胺有利于花药胚状体或不定芽的分化 水解酪蛋白(CH)和水解乳蛋白(LH)也是多种氨基酸的混合物，对胚状体或不定芽或多胚的分化有良好的促进作用 酪氨酸可不同程度地替代水解酪蛋白或水解乳蛋白的作用 3、培养细胞的营养代谢 3.6 植物生长调节物质 生长素 细胞分裂素 其它…… 生长素： 主要作用：诱导愈伤组织的形成、胚状体的产生以及试管苗的生根，更重要的是配合一定比例的细胞分裂素诱导腋芽及不定芽的产生 常用：2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA(萘乙酸)、IAA(吲哚乙酸)、IBA(吲哚丁酸) 作用强弱顺序为：2,4-DNAAIBAIAA 有不同的适宜浓度 3、培养细胞的营养代谢 3、培养细胞的营养代谢 细胞分裂素： 主要作用：促进细胞的分裂和器官分化、延缓组织的衰老、增强蛋白质的合成、抑制顶端优势、促进侧芽的生长及显著改变其他的激素作用。 常用：激动素(KT)、6-苄基腺